CD34＋CD38-Lin-细胞群单个细胞培养的初步研究.pdfVIP

中 国 医 学 科 学 院学 报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE · 论 著 · CD34+CD38一Lin一细胞群单个细胞培养的初步研究 韩有金，齐军元，邱录贵 中国医学科学院 北京协和医学院 血液学研究所 血液病医院实验血液学国家重点实验室，天津 300020 通信作者：齐军元 电话：022电子邮件：jyqi66@gmail．corn 摘要 ：目的 探讨单个CD34+CD38一Lin一细胞在体外培养体系中的生存和增殖能力。方法 用免疫磁珠从脐带 血单个核细胞中分选出Lin一细胞，然后用流式细胞仪筛选出CD34+CD38一Lin一细胞，并由流式细胞仪将单个CD34+ CD38一Lin一细胞直接放入培养孔中进行培养。培养基中分别加细胞因子Shh、BMP．4或Jagged一1作为实验组，未加细 胞因子的以等量PBS作为对照。应用细胞计数法、集落培养计数法检测不同培养条件下各组细胞数量的变化及集落形 成能力的差异。结果 培养第3天，各组均能见到单个细胞的分裂倍增现象。培养 1周后，各实验组的细胞存活率均高 于对照组，顺序为Jagged-1组BMP-4组Shh组对照组 ，而每孔细胞数的顺序为Jagged-1组BMP-4组 对照组； 实验组中每孔细胞数为0的孔数明显低于对照组，尤其是Jagged-1组，而实验组每孔细胞数多于17的孔数高于对照组， 其中BMP-4组最高。实验组的每孔集落数明显高于对照组，实验组之间的差异并不明显。另外，单个细胞集落培养后 能形成红系爆式集落及粒细胞、单核细胞、粒一单核细胞集落形成单位等各式集落。结论 单个CD34+CD38一Lin一细 胞能够单独完成生存、自我更新及增殖等过程，而添加细胞因子Shh、BMP-4、Jagged一1能够增强其上述能力，显示微 环境的重要性。单个CD34+CD38一Lin一细胞只能形成一种细胞集落，说明微环境对于维持CD34+CD38一Lin一细胞 群的全能性必不可少。 关键词：CD34+CD38一Lin一细胞；Shh；BMP一4；Jagged-1；自我更新；增殖；微环境 中图分类号：Q28 文献标志码：A 文章编号：1000-503X(2012)O1-0019—06 D0I：10．3881／j．issn．1000-503X．2012．01．004 A PreliminaryStudyontheCultureofSingleHematopoieticStem Cell HANYou-jin，QIJuny·uan，QIuLu-gui StateKeyLaboratoryofExperimentalHematology，InstituteofHematoloyg ＆ BloodDiseasesHospital， CAMSandPUMC，Tianjin300020，China Correspondingauthor：QIJun-yuan Tel：022E—mail：jyqi66@gmail．corn ABSTRACT：0bjective Toinvestigatethebiologicalbehaviorincludingsurvivalandproliferationof CD34+CD38一Lin— cellswhen theyareculturedatsinglecellleve1．Methods Purifiedumbilicalcord bloodCD34+CD38一Lin— cellswereseparatedatsinglecelllevelin96-well