一种新的遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症ⅩⅢA亚基mRNA大片段缺失的鉴定.pdfVIP

2o1生蔓月第33卷第 4期 ChinJHematol，April2012．Vo1．33．No．4 · 299 · · 论 著 · 一 种新的遗传性凝血因子Ⅻ缺乏症 )皿A亚基 mRNA大片段缺失的鉴定 马秋玲 周克元 周鹏 蔡望伟 【摘要】 目的 分析 1个遗传性凝血 因子)皿缺乏症家系白细胞表达的凝血 因子Ⅻ A亚基 mRNA。方法 采用 RT—PCR、半定量 RT—PCR、克隆和测序方法分析遗传性凝血因子Ⅻ缺乏症家系先证 者及其亲属外周血单个核细胞的凝血因子Ⅻ A亚基 mRNA；用 SWISS．MODEL分析凝血因子)皿A亚 基基因突变对蛋白质结构和功能的影响。结果 ①先证者凝血因子Ⅻ A亚基 mRNA存在第 11到第 279个密码子大片段缺失 (DelCD11-279)，该缺失为阅读框内缺失，编码 1条464个氨基酸截短的凝血 因子Ⅻ A亚基 ；先证者的凝血因子Ⅻ A亚基 mRNA表达量明显减少；②三维结构分析显示 DelCD11． 279的凝血因子ⅫA亚基 mRNA所编码 1条464个氨基酸截短的凝血因子ⅫA亚基蛋 白缺乏部分活 性肽、p一夹层区和部分催化中心区，不能形成正常的催化中心，缺乏转谷氨酰胺酶活性。结论 凝血因 子)皿A亚基mRNADelCD11—279与遗传性凝血因子)皿缺乏相关，该家系患者凝血因子)皿A亚基基因 表达水平降低是导致凝血因子)皿缺乏的原因之一。 【关键词】 因子)皿； 因子)皿缺乏；DNA突变分析 IdentificationofanovellargedeletionoffactorXlllsubunitA mRNA associatedwithhereditaryfactor J01Ideficiency MAQiu—ling ．ZHOUKe—yuan，zHoUPeng，CAIWang—wei． DepartmentofBiochemis— tryandMolecularBiology．H口inanMedicalCollege．Hoikou 571101．China Correspondingauthor：CAI耽 —we ，Email：caiww591 0@ ．corn 【Abstract】 0bjective ToanalyzetheexpressedmRNAofthefactor)皿subunitA(FxmA)inmono— cyteinahereditaryfactorj皿 (F)叨)deficiencyfamily．Methods TheFX$AmRNAoftheprobandandthe otherfamilymemberswasanalyzedbyRT—PCR，semi—quantitativeRT—PCR，cloningandsequencing．The threedimensionalstructureoftheproteinwaspredictedbySW ISS—MODELandviewedbyRASM10L．Results ①Alargeinframedeletionfromcodons11to279，spanningrfomexon2to7ofFxmA (DelCD11-279)， wasidentifiedintheproband atmRNA levelandaturncated protein iSpredictedcomposedof464 amino acids．Comparedwiththenormalandtheotherfamilies．theprobandshowed1owerlevelofF)皿A mRNA in RT—PCR．(2)SWISS—MODELanalysisshowedthattheturncatedproteinlackedtheB—sandwichandapartof catalyticcore．resultingiUlossofthenormalcatalyticdomains．Conclusion DelCD11_2790fFⅫAmRNA isassociatedwithhereditaryFxmdeficiency．ThereducedexpressinglevelofFxmAgeneisoneofthecauses resultinginFxmdeficiency