海水海泥中病原性副溶血性弧菌时间分布及检出方法比较的研究.pdfVIP

Y902936 分类号 单位代码：10114 密级 学 号：M03004 海水海泥中病原性副溶血性弧菌 时间分布及检出方法比较研究 学 员 姓 名： 韭且韭 指 导 教 师： 厘重壁 熬援 申请学位门类级别： 尘基卫生亟±!§堡旦2 研 究 方 向： 丕缝固重量丝压 所 在 学 院： 垒基里生堂瞳 2006年4月8日 摘要 目的：副溶血性弧菌(gibrio 河交界处及海产品中，是引起沿海地区食物中毒的主要病原微生物，而采用一般的 细菌培养分离方法很难从环境样品(海水、海泥)中检出神奈川现象阳性并且产生 Direct 耐热直接溶血毒素(Thermostable 研究TDH阳性副溶血性弧菌在海水、海泥中的分布及如何提高海水、海泥中病原 性副溶血性弧菌的检出率，从而为预防由副溶血性弧菌引起的食物中毒的提供依据。 方法：用MPN法检测静冈县海水、海泥中副溶血性弧菌数。三次增菌后采用 PCR法检测样品培养液中tdh遗传因子的有无，用K型血清致敏免疫磁珠进行对带 有特定K型抗原副溶血性弧菌的浓缩收集，再通过接种于神奈川现象培养基，挑选 出致病性的产生TDH的副溶血性弧菌。对分离到的TDH阳性副溶血性弧菌菌株进 行脉冲场凝胶电泳比较。 结果：海水、海泥中副溶血性弧菌数量7月份～9月份最多，与副溶血性弧菌食 物中毒多发季节相一致，每100ml海水及每1009海泥中7、8、9三个月的副溶血性 弧菌MPN值均在103以上，tdh阳性的副溶血性弧菌数约占海水、海泥中副溶血性 的海水及36．4％(4／11)的海泥中的副溶血性弧菌带有tdh遗传因子。对tdh阳性检 体培养液用免疫磁珠对带有特定K抗原的菌株进行浓缩、收集后，接种于神奈川现 象培养基，分别从1份海水和l份海泥中检出神奈川现象阳性并且产生TDH(反相 被动血球凝集结果均为阳性反应)的副溶血性弧菌，血清型为03：K6。该血清型 与同年静冈县境内发生的矿P食物中毒患者分离菌株中检出率最高的血清型一致。 经Sfi I，NotI限制性内切酶处理后，脉冲场凝胶电泳比较，海水与一名患者分离 菌株、海泥与另外两名患者分离菌株的PFGE指纹基本相同。三次增菌培养后的副 溶血性弧菌03：K6菌株分离率高于仅用碱性蛋白胨水增菌的。同一份样品、同样进 行三次增菌培养经免疫磁珠处理后的03：K6菌株分离率高于未经处理的。这说明免 疫磁珠法对带有特定K型抗原的副溶血性弧菌起到了明显的浓缩和收集作用。 结论：与一般的细菌培养分离法相比，三次增菌培养法、PCR法、免疫磁珠法 和神奈川I现象的结合使用，可提高海水、海泥中病原性副溶血性弧菌的检出率。脉 冲场凝胶电泳结果从分子生物学的角度表明了海水、海泥TDH阳性副溶血性弧菌 03：K6菌株与食物中毒患者分离菌株的同源性。本课题为解决难于从环境样品中分 离出TDH阳性副溶血性弧菌的问题提供了有效手段，也为研究TDH阳性副溶血性 弧菌在环境中的分布及由其引起的食物中毒的预防提供了重要依据。 关键词：耐热的直接溶血毒素(TDH)，副溶血性弧菌，聚合酶链反应，免疫磁 珠法，神奈川现象 V Abstract are Vibrio andHbrio 0bjective：There Parahaemolyticuspathogen incoastseawaterandmarine