不同程度失神经支配后豚鼠面肌细胞凋亡及其相关基因表达实验的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 CMJ围神。伤及一些神经源性的疾病可导致肌肉失神经支配 萎缩和功能的异常。临床治疗的最终目的就是阻止失神经支配后 的肌肉姜缩和保持长时间失神经支配后肌肉的功能或通过移植重 建肌肉的功能。对于面神经功能难以恢复并遗留失神经支配后的 肌肉萎缩和面部畸形的患者，目前没有4好的治疗措施}r4究表 明，失神经支配后的肌细胞的凋亡是肌肉萎缩时肌细胞核丢失的 主要原因。(M.时，调控凋亡的基因的研究发展也很迅速。’因而我 们设想利用调控凋亡及其相关基因表达以阻止肌肉萎缩，增加肌 肉体积，为失神经支配疾病的治疗，在没有很好的治疗方法时提供 新的治疗概念 我们制作了豚鼠面神经不同损伤程度的模 型。、观察面肌 的时间过程及其相关基因bcl一2和bax表 达情况。为探究骨骼肌细胞凋亡的机制及未来的基因治疗提供线 胞凋亡(或程序性细胞死亡)是在进化上高度保守的细胞 自杀，是与有丝分裂相反的细胞自稳平衡机制，表现为超徽 结构的形态学变化，形成凋亡小体，或通过电泳表现DNA带的梯 度图形。近年来用TUNEL技术可以原位检测到早期的细胞凋亡。 我们在实验中应用了TUNEL技术。Bel-2(凋亡抑制基因)和 bax凋亡促进基因)与细胞凋亡关系密切。我们同时研究了这些 基因编码蛋白的表达。 实 验 方 法 本实验建立50只豚鼠右侧面神经切断与阻断30秒钟的动物 模型。于术后1-8周分期取双侧口轮匝肌，制作冰冻切片，进行 如下检测: 1.应用TUNEL技术检测不同时期面神经切断组与阻断组肌 细胞凋亡动态过程。探讨失神经支配与凋亡的关系。 2.应用免疫组化技术一SABC法，检测不同时期面神经切断 组与阻断组凋亡相关基因bcl一2和bax的表达，探讨其对骨骼肌 细胞凋亡的调节作用。 实 验 结 果 1.正常的豚鼠面肌: 光镜下，常规HE染色切片中可以见到，正常豚鼠的口轮匝肌 呈多角形，周围有毛根及腺体。在肌细胞群中，TUNEL染色的核 DNA片段有0.4*0.590。正常的肌细胞不表达bcl-2,偶尔有 圣犯笼表达。肌束膜及有些血管平滑肌细胞中有bcl一2和bax的表 达。 2.豚鼠面神经切断组 光镜下，常规HE染色切片中，术后2周开始可以见到，有少 数的肌细胞萎缩，并有肌束膜、肌内膜及结缔组织增生。术后8 周，有较多纤维增生包裹着萎缩的肌细胞，萎缩 的肌细胞呈圆形， 椭圈形，少部分呈多角形。切片中未见到凋亡小体及凋亡细胞。 豚鼠的口轮匝肌TUNEL染色中，在观察的各个时期显示了持续高 水平的DNA片段的阳性表达率，约为3490，各组与对照组相比， 有显著差异(P0.01)。同时可以看到，在不止一张切片上，有 些肌细胞即显示DNA片段阳性核也显示阴性核。肌细胞中没有 坏死和炎性细胞浸润。在切断面神经的各个时期，均有’bcl一2和 bax表达，术后第1周与对照组间有显著差异(p0.01)。在免疫 组化染色切片中，bax几乎在所有的肌细胞中强烈表达，bcl-2的 表达约占250，在萎缩的肌细胞中表达明显增多。在术后6周 时，bc1-2的阳性率明确增加，同时bax阳性率有一定程度的减 少，但仍高于对照组(p0.01)。 3.豚鼠面神经阻断30。组 光镜下，常规HE染色切片中可以见到，术后2一8周，肌细胞 萎缩及结缔组织增生，但不如切断组明显。术后8周，肌细胞直径 恢复到正常大小，仅有少数散在的萎缩肌细胞存在，但纤维化仍存 在。在术后第1-4周，面神经阻断30s的豚鼠的口轮匝肌显示了 明显的核DNA片段的增加，阳性率为32%，术后第1周与对照组 间差异显著(p0.01)。术后6周时，有15.6%的肌细胞核显示 了染色质破坏。术后8周时，偶尔可见核DNA片段。没有肌细胞 的坏死。Bel-2在观察中持续存在。Bax在面神经受损伤的整个 过程中明确表达，但较面神经切断组阳性率明显降低，在术后8周 迅速下降至接近正常水平，与切断组间差异显著(p0.01)。 讨 论 实验性的面神经切断组和面