铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类机制研究及分子流行病学调查.pdfVIP

铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类机制研究 及分子流行病学调查 摘 要 [目的] 研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制，同时 利用重复序列聚合酶链反应（rep-PCR）进行分子流行病学调查。 [方法] 收集新华医院在2004 年7 月~ 2005 年8 月临床分离的 耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌共58 株，对碳青霉烯类抗生素 耐药机制进行研究：1）在M-H 琼脂平板中加入针对不同酶及外排泵 抑制剂，进行K-B 法药敏试验；2）用改良三相水解试验检测β-内酰 胺酶； 3）用等电聚焦电泳进行酶的分析；4）用聚合酶链反应( PCR) 检测金属酶基因（IMP、VIM）以及外膜膜孔蛋白基因（OprD2）；5） 采用重复序列聚合酶链反应（rep-PCR）进行基因分型。 [结果] 58 株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中，有52 株持续高产 AmpC 酶合并主动外排系统的过度表达，其中 15株同时伴有外膜膜孔 蛋白OprD2 缺失；1株既持续高产AmpC 酶又有ESBLs 且合并过度表达 主动外排；在5 株既不产β-内酰胺酶又无过度表达主动外排的细菌 中，有 1株OprD2 基因缺失；58 株均未检测到金属酶。对58 株菌株 进行重复序列聚合酶链反应（rep-PCR），经电泳后得到3-10 条条带， 分成 16个基因型。从重症监护室（ICU）病人分离所得的菌株，主要 为Ⅱ型和Ⅲ型，分别占71.79%(28/39)和 17.95%（7/39），从急诊科、 2 高干病区和呼吸科病人标本中分离所得的菌株，除有各自相对独立的 基因型外，同时还有与 ICU菌株重叠的基因型存在。其余病区病人所 分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌菌株数量较少，分布也较分散与独 立。ICU内可能同时存在多个基因型的流行。 [结论] 本院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机 制是持续高产AmpC 酶合并主动外排系统的过度表达，其中约 1/3 菌 株又同时伴有外膜膜孔蛋白OprD2 缺失，未检出产生金属酶菌株。ICU 存在多个型别的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的持续存在和流行，临床 医护人员应对此高度重视，及时采取有效措施，控制耐碳青霉烯类铜 绿假单胞菌的播散。 [关键词] 铜绿假单胞菌，碳青霉烯类，耐药机制， 重复序列聚合酶链反应，分子流行病学 3 CARBAPENES-RESISTANT PSEUDOMONAS AERUGINOSA： INVESTIGATION OF RESISTANT-MECHANISM AND EPIDEMIOLOGICAL STUDY IN NOSOCOMIAL INFECTION ABSTRACT [Objective] To study the antibiotic mechanism of carbopenems-resistant Pseudomonas aeruginosa, and investigate its molecular epidemiology by repetitive-sequence PCR. [Method] 58 strains of imipenem and meropenem resistant Pseudomonas aeruginosa were isolated from clinical departments in July and August, 2004, in Xinhua hospital. (1)Based on K-B technique, different enzyme inhibitors and efflux pump inhibitors were added to M-H agar plates to generate an improved K-B technique which was applied in susceptibility tests. (2)T