小麦TaRanBP基因功能的初步分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 小G蛋白(small GTPases)是真核生物中广泛存在的一类调节各种生命活 动的信号分子。根据结构与功能的不同，小G蛋白家族成员可分成五个亚家族， 和非活化态(GDP结合态)的相互转换行使着各种功能。RasGTPases在酵母和 哺乳动物中调节细胞增殖过程； Rho GTPases调控肌动蛋白重组过程，并参与 MAP激酶的细胞信号转导过程等；Rab 过程中起着不同的重要作用；而RanGTPases则在核孔位置调节着蛋白和RNA 分子的运输过程。 小G蛋白附属蛋白调节着小G蛋白活化态与非活化态之间的转换，其中鸟 nucleotide 核苷酸交换因子(guanine exchangefactors，GEFs)可以催化小G蛋白转 proteins， GTPases GAPs)和小G蛋白结合蛋白(smallbindingproteins)可以激活小G蛋白自 身的水解活性，从而将其转变成非活化态形式。 相比其它小G蛋白，Ran GTPases及其附属蛋白在真核生物中的研究相对较 少。已有的成果表明它们主要在核质运输过程中及对相应的信号转导途径起调 节作用。而针对RanGTPases及其附属蛋白在真核生物尤其是高等植物个体发育 过程中的作用，目前报道还很少。 为了揭示Ran结合蛋白(Ran bindingprotein,RanBP)在植物发育过程中的作 用，本文通过转基因手段对其功能进行了研究。在此之前，本实验室已从小麦 bp， 编码207个氨基酸。通过农杆菌介导叶圆片法，分别用正义、反义及TaRanBP 与GFP融合蛋白等表达载体转化烟草，并成功获得转基因植株。亚细胞定位观 察发现TaRanBP蛋白主要定位于细胞质内，尤其是在核膜附近富集。生理学和 细胞学等方面的研究分析发现，TaRanBP基因在烟草个体发育过程中产生重要 作用。过量表达TaRanBP基因的转基因植株在一定数量上表现出愈合的花冠简 上出现不同程度开裂，花冠筒上有附生舌状花瓣，及带有花瓣状颜色的花萼等 异常花表型。同时，转反义基因在一定程度上促进了转基因植株初生主根的生 小麦TaRanBP基冈功能的初步分析 长(为对照烟草的2．3倍)，而转正义基因烟草与对照烟草的初生主根长度差异 不明显。用碘化丙锭(PropidiumIodide，PI)进行根部细胞染色。观察发现，不同的 转基因烟草与对照烟草之间在根的各个不同形态区域的细胞大小差异不明显， 推测根长的差异可能是由于整体细胞数目变化的原因导致。向重力性实验发现， 转反义基因烟草幼苗较对照烟草的向重力性反应增加，而转正义基因的则表现 Acid，LAA)的添加处理可以恢复转反义基因 为降低。激素吲哚乙酸(Indoleacetic 烟草的向重力性异常表型，而对转正义基因烟草几乎无影响。添加激动素(Kinetin, KT)的处理发现不同转基因烟草和对照烟草的向重力性均有减弱。观测后期，转 正义基因的向重力敏感性较对照烟草得到恢复。测量不同转基因株系Tl代幼苗 鲜重，发现不同转基因烟草和对照烟草的幼苗鲜重动态变化在各个时间点有差 异，且差异情况不尽相同。而不同转基因幼苗Tl代幼苗可溶性蛋白含量较对照 烟草有不同程度的下降。这种下降并没有影响转基因烟草的整体生长进程，开 花期和结实情况与对照烟草相比也无明显变化。 关键词：小G蛋白；TaRanBP基因；转基因烟草；异常花；根长；向重力性 Ⅱ Abstract Abstract