《细胞凋亡》课件4（61张）（中图版必修1）.ppt

4. IAP （inhibitor of apoptosis，细胞凋亡抑制因子） IAP超家族的成员较多，如c-IAP1, c-IAP2,XIAP, NIAP 和Survivin，新的成员在不断的被发现。IAP家族成员有一个共同的特征，含有一个或多个７０个氨基酸的重复序列（BIR），类似于zinc指状的结构。c-IAP1、 c-IAP2和 XIAP含有环指装结构。BIR功能域和之间的连接区域介导对caspase的抑制作用，而环指状结构则具有泛素化蛋白连接酶的作用，介导caspase－３和－７的泛素化降解作用。 5. Smac/Dablo 在细胞凋亡过程中它可以从线粒体释放进入细胞质。成熟的Smac蛋白产生一个新的N基端,这个N基端的前面4个氨基酸可以与lAP的BIR结构域结合。Smac的功能就是拮抗活化胱解酶9与lAP的结合。Smac 与BIR2的结合可以中和XlAP对胱解酶9的抑制，促进凋亡。 七.细胞凋亡的生物学意义 细胞凋亡与个体发育 细胞凋亡与免疫 细胞凋亡与人类疾病 免疫细胞凋亡 胸腺细胞成熟过程中的凋亡 阳性选择 阴性选择 激活诱导的细胞凋亡：（activation-induced cell death，AICD） CTL诱导靶细胞的凋亡：穿孔素介导的靶细胞死亡 Fas介导的靶细胞凋亡 B细胞凋亡:经过基因重排,92%的细胞凋亡 细胞凋亡与人类疾病 细胞凋亡受抑制有关的疾病 恶性肿瘤:滤泡性淋巴瘤、乳腺癌、等白血病 自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、肾炎 病毒感染性疾病：腺病毒病、庖疹病毒病 细胞凋亡增多有关的疾病 艾滋病： 神经变性性疾病：早老性迟呆、帕金森病、小脑退化病 骨髓发育不全性疾病 缺血性疾病 酒精中毒性肝炎 八. 细胞凋亡的检测方法 . 一、细胞凋亡的形态学检测 . 二、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 三、线粒体膜势能（??mt）的检测 四、DNA片断化检测 五、TUNEL法 六、Caspase-3活性的检测 七、WB检测 八、凋亡相关蛋白TFAR19的表达和细胞定位分析 细胞凋亡的形态学检测 1 光学显微镜和倒置显微镜 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色、苏木精染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，呈新月状附在核膜周围。 2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一般以细胞核染色质的形态学改变来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有：HO ,Hoechst 33342;HO, Hoechst 33258; DAPI。 3 电子显微镜观察 Nuclear morphological changes of HeLa cells in apoptosis process（488nm ?400） 电镜观察凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。 磷脂酰丝氨酸（PS）外翻分析 （Annexin V法） 磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，在凋亡早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35?36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、R-PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。 Annexin V-FITC Fluorescence PI Fluorescence Time course of apoptosis in TF-1 cells cultured in GM-CSF-free medium Apoptotic HeLa cells were stained with FITC-AnnexinV+PI 线粒体膜势能（??mt）的检测 线粒体荧光染料：Rhodamine 123、DiOC6（3）、JC-1、TMRM等对线粒体膜电位非常敏感，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 DNA片段化分析 细胞凋亡时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩, 染色