对虾桃拉综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立.pdfVIP

16 福建畜牧兽医 第35卷 第2期 2013年 对虾桃拉综合征病毒实时荧光定量PCR 检测方法的建立 方成俊 陈俊玉 王碧生 杨奇志 潘迎芬 陈 晖 陈旭新1 1 1 2 1 1 1 （1.东山出入境检验检疫局 福建东山 363401； 2.美国 Protein Simple公司中国广州办事处 广州 510000） 摘 要 目的：建立一种敏感、定量、快速、特异、安全的实时荧光定量PCR检测方法，用于对虾桃拉综合征病毒（TSV）的早期诊 断和监测。方法：从GeneBank下载所有Taura病毒的序列，用生物软件进行序列比对，在TSV保守区序列设计特异性引物和探 针。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化，提高特异性和灵敏度。结果：检测灵敏度达450个病毒拷贝，超过普通PCR100倍； 检测特异性为 100%，高于普通PCR；检测时间在60min 内，约为普通PCR的1/4；有效解决PCR产物的气溶胶污染问题，安全 性高。结论：本研究应用荧光定量PCR技术用于对虾桃拉综合征病毒检测具有敏