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富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤保护作用和机制的实验研究 中文摘要 富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤保护 作用和机制的实验研究 中文摘要 第一部分 富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损 伤保护的研究 目的：通过建立大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）后脑损 伤早期模型，初步探讨富马酸二甲酯（Dimethylfumarate ，DMF ）对SD大鼠蛛网膜下 腔出血后早期脑损伤是否具有神经保护作用。 方法：成年健康雄性SD大鼠96只，随机分为两部分（48只/部分），一部分观察 行为功能评分和水肿指数，另一部分单纯观察血脑屏障。每部分分为4组，对照组 （n=12 ）、SAH组（n=12 ）、安慰剂组（n=12 ）、DMF组（n=12 ）。经大鼠自体非肝素 化股动脉动脉血注入视交叉前池，建立蛛网膜下腔出血后脑损伤早期模型。建立模型 后1h、12h、24h和36h经胃管灌注DMF （15mg/kg），48h观察大鼠行为评分和功能变 化，立即处死大鼠，取大鼠颞底皮层做标本，测定血脑屏障和脑水肿变化，探讨富马 酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤是否具有神经保护作用。 结果：通过对比对照组大鼠，SAH 组大鼠食欲、认知功能和活动能力明显降低， 血脑屏障破坏明显，建模后 48h 测定大鼠皮层组织伊文氏蓝（EB ）含量达到 21.93ng/mg，脑组织含水量明显增加，48h 水肿百分数达到82.45%；相比SAH 组， 富马酸二甲酯治疗组神经功能明显改善，48h 测定血脑屏障和脑水肿指数分别为： 14.12ng/mg、80.72%，并有效改善血脑屏障和降低脑水肿指数；安慰剂组与SAH 组 相对改善不明显。 结论：1.建立SD 大鼠SAH 模型后，观察到大鼠SAH 后48h 神经行为学功能评 分明显降低，血脑屏障破坏明显和脑组织水肿含量增加显著，说明大鼠SAH 后存在 早期脑损伤（EBI ）。2.通过胃管灌注DMF 后，改善大鼠SAH 后神经行为功能、血脑 I 中文摘要 富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤保护作用和机制的实验研究 屏障和降低脑水肿，进而说明DMF 对大鼠SAH 后EBI 具有一定神经保护作用。 关键词：富马酸二甲酯；早期脑损伤；蛛网膜下腔出血 第二部分 富马酸二甲酯对大鼠SAH 后大脑皮层Keap1-Nrf2-ARE 氧化应激传导通路的调控作用 目的：观察大鼠 SAH 后大脑皮层Keap1-Nrf2-ARE 氧化应激传导通路及其下游 抗氧化酶基因表达变化及富马酸二甲酯对Keap1-Nrf2-ARE 氧化应激传导通路影响， 探讨富马酸二甲酯对SAH 后早期脑损伤神经保护作用机制。 方法：健康成年雄性SD 大鼠48 只，随机化分为：对照组 (n=12), SAH 组 (n=12), 安慰剂组 (n=12) 和 DMF 组 (n=12) 。采用向视交叉前池注血技术，构建大鼠 SAH 模型，对照组开骨窗后不注入动脉血，DMF 组给予胃管灌注DMF 治疗，每次注射剂 量15mg/kg，分别在SAH 后1h、12、24h 和36h 胃管灌注，共灌注4 次。安慰剂+SAH 组注射等容量溶剂（生理盐水，15 mg/kg ）。48 小时后断头处死大鼠，立即取大鼠颞 底皮层脑组织后做标本检测，采用RT-PCR 法测定NQO1 、GST-α1 和HO-1 的mRNA 表达，酶活性检测GST-α1 和NQO1 量；采用免疫组化方法检测HO-1、Nrf2 和Keap1 表达；Western blot 法测定Nrf2 、Keap1 和HO-1 变化；Fluoro-jade B 和TUNEL 染色 方法检测神经细胞凋亡情况；EMSA 法检测Nrf2 的DNA 结合情况和结合活性；ELISA 法测定IL-1β、IL-6 和TNF-α 炎症介质的表达。 结果：RT-PCR结果