甘油合成关键酶基因CgGPD1在大肠杆菌和产甘油假丝酵母中的表达.pdfVIP

摘要 摘要 甘油是一种重要的轻化工原料，已广泛应用于化妆品、牙膏、烟草、香精、水性 油墨、印染纺织、涂料、合成树脂、皮革、造纸、制药、食品和国防等十多个领域的1700 多种产品。发酵法生产甘油与甘油的其它生产方法相比有着特有的优势。耐高渗产甘油 假丝酵母WL2002．5是本研究室拥有自主知识产权的甘油生产菌株，是迄今为止国内外 报道的生产性状最优良的甘油生产菌株，其发酵生产甘油具有高产量、高转化率和高回 收率等优点，已经应用于大规模的发酵甘油工业生产中。 胞浆3．磷酸甘油脱氢酶是酵母甘油合成的关键酶，有研究表明，提高甘油合成的最 在前期研究的基础上，本文采用PCR的方法扩增了产甘油假丝酵母胞浆3．磷酸甘油脱 同浓度NaCl、葡萄糖胁迫下表达情况。 由于产甘油假丝酵母是工业生产菌株，其在细胞壁结构上的特殊性等原因使得常规 的酵母转化方法转化效率很低。为此本文将构建的含CgGPDl基因不同拷贝数根癌农杆 菌双元载体电击转入根癌农杆菌LBA4404中，利用根癌农杆菌介导转化的方法将单拷 子并命名为Candida glycerinogenes-CgGPDl(C．g-G)。 通过筛选得到一株高产甘油的产甘油假丝酵母转化子C．g．G8，实验表明CgGPDl 全长基因的插入并没有改变C．g．G8的生长过程，转化子C．g．G8的平均耗糖速率明显对 原始菌株C．g要快，CgGPDl全长基因的整合在一定程度上提高产甘油假丝酵母甘油产 量，其甘油产量比原始菌株提高了12．08％；其甘油发酵时间比原始菌株发酵时间缩短 6 维持在较高的水平，转化子的平均酶活比原始菌株的平均酶活提高27．55％，这说明通 过根癌农杆菌介导转化的方法将CgGPDl全长基因转入产甘油假丝酵母并进行了有效 的表达。 关键词：甘油；产甘油假丝酵母；胞浆3．磷酸甘油脱氢酶；根癌农杆菌介导转化； 甘油合成 Abstract Abstract the is isall materialfor andchemical Glycerolimportant light industries．Now,itwidely usedinthe cosmetic，toothpaste，tobacco，essence，printing anddefenseindustriesandasafeedstockforthe paper,syntheticresin，pharmaceutical，food ofvarious thetraditional methods，thezymotechnics production chemicals．Compared谢t11 hasitsown inthe of WL2002-5isa adventagesynthesisglycer01．Candidaglycerinogenes for anditsintellectual toour excellentstrainglycerolproduction rightsbelongslab， property severaluseful as the has toleranceto yeast properties，such highglucose and t