盾叶薯蓣胚乳培养再生植株及其倍性鉴定.pdfVIP

摘要 盾叶薯蓣(Dioscorea ZingiberensisC．H．Wright)是薯蓣科薯蓣属多年生草本植物，以 干燥根茎入药，是一种极为重要的药用植物。主要药用成分是薯蓣皂苷元(disogenin)， 具有降血脂、抗衰老、抗肿瘤、消炎、保肝等多种功效，被医药界称为“药用黄金”。 但盾叶薯蓣在采挖时缺乏科学性和计划性，造成资源蕴藏量急剧下降。在繁殖时由于选 用的是根茎存在繁殖率低、生长缓慢、品质退化等问题。因此，针对这些问题，我们对 盾叶薯蓣的胚乳进行培养并对三倍体再生植株的鉴定方法及快繁技术体系进行了系统 的研究。获得了以下研究成果： 1．筛选出了胚乳愈伤组织诱导与继代增殖的适宜培养基。适宜胚乳愈伤组织诱导 2．0 0．5 的培养基是MS+2,4．D mg／L+6-BAmg／L，72天后可形成淡黄色疏松愈伤组织； 1．0 适宜胚乳愈伤组织继代增殖的培养基是MS+NAA mg／L，愈伤组织的生长速率为 1．16 g／(L‘d)，30天后愈伤组织的增殖量为34。73g／L，是初始接种量(12．5g／L)的2．8 倍。 2．研究了胚乳愈伤组织形成再生植株的途径和适宜培养基。通过正交实验，胚乳愈 伤组织在不同分化培养基上经过180天的培养可通过两条途径分化成苗，一种是不定芽 2．0 途径，一种是类原球茎途径。适宜分化出不定芽的培养基为MS+6-BA mg／L-t-NAA 0．1 3．0 mg／L，分化率为57．06％；适宜分化出类原球茎的培养基为MS+6-BAmg／L+NAA O．2 O．5 mg／L+KTmg／L，分化率为72．25％。 3．盾叶薯蓣胚乳培养再生植株的倍性鉴定。(1)染色体数目鉴定。以腋芽生长点 为试验材料，采用常规染色体制片的方法，结果表明：胚乳培养再生植株染色体数在 占观察细胞总数的10％；染色体数目为20的再生植株占观察植株的10％，染色体数目 在20．30之间的再生植株占观察植株的50％，染色体数为30的再生植株占观察植株的 40％，获得了三倍体植株。(2)形态学鉴定。三倍体与二倍体试管苗相比植株较矮、茎 加粗、叶片较大且变厚、叶色加深。三倍体株高比二倍体减少了23．02％且两者之间具 有极显著性差异，三倍体茎粗、最大叶长、叶宽和叶厚极显著高于二倍体，分别增加了 倍体，减少率为64．98％：单个保卫细胞中叶绿体数目三倍体极显著的高于二倍体，增 1 加率为15．25％。三倍体的气孔器长、宽以及气孔长、宽都要高于二倍体，增加率分别 为：25．98％、4．11％、26．32％、4．11％，且两者之间的气孔长和保卫细胞长具有极显著性 差异，气孔宽和气孔器宽不具有差异性。(4)生理生化鉴定。三倍体与二倍体相比叶绿 素b含量和类胡萝b素含量均达到显著水平，其中，三倍体中叶绿素b的含量与二倍体 相比，平均增加60．71％，类胡萝b素的含量平均增加9．1％，两者叶绿素a的含量未达 到显著水平，三倍体与二倍体相比平均增加了13．63％；可溶性糖含量、可溶性蛋白含 量和POD含量，三倍体与二倍体之间均达到显著水平，SOD含量则达到极显著水平， 其中可溶性糖含量平均增加18．67％，可溶性蛋白含量平均增加8．31％，POD含量平均 鉴定再生植株，在SOD酶谱中，三倍体有3条谱带，二倍体有2条谱带，两者之间有1 条相同谱带；在POD酶谱中，三倍体有4条谱带，二倍体有2条谱带，两者之间有2 条相同谱带，且三倍体中谱带的颜色要深于二倍体。 4．建立了盾叶薯蓣三倍体植株快繁技术体系。适宜于三倍体试管苗快繁的培养基 1．0 为MS+6-BA2．0mg／L+KTmg／L+NAA0．1mg／L，繁殖周期为30天，繁殖