肿瘤抑制基因p16和DNA甲基转移酶基因DNMT3b在胰腺腺癌细胞系和其它肿瘤细胞系中的表达.pdf

f研究发现；自建的5个人胰腺腺癌细胞系Pl至P7中，有两个细胞系(P4、 P7)、的p16基因发生纯合性缺失，而在所有5个细胞系中没有发现p16的基 水平全部没有表达。 10在p16阴性细胞系中的表达是p16阳性细胞系中的1．79倍；而选择性剪接 外显子exon 细胞系中的2．6倍；exon 21和exon22都表达的比例在p16阴性细胞系中是在 个选择性剪接外显子表达几率升高，而在P16基因存在的情况下，表达缺失的 几率升高，看来P16和DNMT3b是相互排斥的。由于一个基因发生改变消除 了同一途径中另一个基因改变的需要，所以它们可能在同一条途径中起作用。 进～步推论，可能是DNMT3b的从头甲基化活性使肿瘤抑制基因P16的启动 子CpG岛发生异常从头甲基化而失活，成为P16失活的3个原因之一。但是 目前尚缺乏明确有力的依据，需要进一步研究分析。 在自建的5个人胰腺腺癌细胞系和另外7个肿瘤细胞系共12个细胞系中， 平很低，肿瘤细胞似乎不需要DNMT3b的从头甲基化活性来提供另外的选择 性生长优势。另一种可能是DNMT3b的DNA从头甲基化活性是非常高效的， 即使少量表达就可以造成肿瘤细胞和正常细胞中DNA甲基化模式的差异。但 是不能确定肿瘤细胞为什么表达大量没有功能的DNMT3b蛋白质。也许细胞 会根据生长需要调节不同成分的表达比例：也许简化的DNMT3b蛋白质具有 另外的功能。 在本组12个肿瘤细胞系中，有5个细胞系的P16基因在第一外显子中存 10，而 外显子中没有发生DNA甲基化的细胞系没有一例(0／4)表达exon10。选择 性剪接外显子exon21和exon 22都表达的比例在p16基因外显子甲基化阴性 细胞中是甲基化阳性细胞的3．42倍。说明DNMT3b基因在肿瘤抑制基因p16 的外显子发生DNA甲基化的细胞系中表达选择性剪接外显子eXO／／10，而不 表达exon 2l和exon 22。由此推测p16基因外显子中DNA的甲基化不需要 用。 lO 在乳腺浸润性导管腺癌组织和癌旁正常对照组织中，DNMT3b的exon 在肿瘤组织中的表达是在正常组织中的3．24倍。exon21和exon22都表达的 比例在肿瘤组织中是在正常组织中的1．76倍。说明这3个选择性剪接外显子 在肿瘤组织中相对于正常组织表达几率升高；DNMT3b基因可能和肿瘤有关。 但是DNMT3b表达增高的倍数并不多，可能是在新鲜肿瘤组织中混有正常组 织成分造成的。DNMT3b在肿瘤组织中表达上调的结果和他人的研究结果一 致。但是目前仍然不明确它在肿瘤中的具体作用和具体变化是什么，还需要进 行更为深入细致的工作。 由于肿瘤抑制基因p16在被研究的这些肿瘤细胞系中没有发生启动子区域 CpG岛的异常从头甲基化，所以无法根据本实验评价这一现象和DNA甲基转 移酶DNMT3b表达之间的关系。但是可以预测，如果CpG岛的异常从头甲基 化是DNA甲基转移酶作用的结果，这也许不是单纯由于表达水平改变引起的， 其它因素包括转录后调节、翻译后改造、亚细胞水平定位等等。不同的剪接形 式很可能造成催化活性的改变，或者位点结合特异性的改变。对选择性剪接进 行体外功能研究将会对上述疑问有所帮助。另外，可能存在其它因子调节它们 的活性，，上哟直接与这些酶相互作用，或者调节它们与DNA作用底物的相互 作用。F。 展中的作用R益显现，DNA分子非序列改变对细胞生物学行为的影响同益受 到重视。研究二者的相互作用对于理解胰腺腺癌的分子病理学会有很大帮助。 4 英文摘要 cancerremainsa in and Pancreatic treatment， problemdiagnosis