土槿乙酸的抗肿瘤作用及其作用机制研究.pdf

中文 摘 要 土谨乙酸的抗肿瘤作用及其作用机制研究 摘 要 本实验室从我国的松科植物金钱松 (Pseudolarix KaempferiGord)的根皮及近根皮中分离出来土t酸类等二 菇类化合物，在此过程中发现了土模乙酸 (pseudorlaric acid-B,PLAB)在体外有较强的抗肿瘤活性，且具有良好的 量效关系。本文进一步研究了PLAB对体外培养的肿瘤细胞 和动物移植性肿瘤的抑制作用及特点，并初步探讨了它的作 用机制。 \ 1PLAB的体外抗肿瘤作用 本文通过体外MTT,SRB及集落形成方法发现PLAB对 多数肿瘤细胞的杀伤力很强，ICS。为0.17pmol/L 5.201mol/L，但单从体外的MTT结果来看，PLAB对癌细胞与 正常细胞的选择性不强，对人的肾近端管状上皮细胞(HKC) 的IC50为5.77gmol/L。从SRB结果可看出，PLAB主要通过抑 制肿瘤细胞生长而起抗癌作用，对HELA,SKOV3的GI、分 别为1.12pmol/L,0.49pmol/L，但LC5。达到11.35pmol/L, 16.73gmol/L。通过对HELA,SKOV3和HCT8细胞的生长曲 线及集落形成的影响的观察，发现不同浓度的PLAB对肿瘤 细胞的生长有明显的抑制作用。 2 PLAB的体内抗肿瘤作用 体内移植肿瘤实验亦观察到PLAB对小鼠实体型肝癌 H22及Lewis肺癌有一定的治疗作用。连续腹腔注射PLAB (30mg/kg/d及60mg/kg/d)10天，对小RH22肝癌的生长抑制 中 文 摘 要 率分别为14.4%和40.1%，大剂量与对照组相比具有显著性差 异 (P0.01);对小鼠Lewis肺癌的生长抑制率分别为39.1% 和47.0%,与对照组相比均具有显著的统计学意义 (P0.01), 说明PLAB在体内、体外试验均表现出良好的肿瘤抑制作用。 3 PLAB对肿瘤细胞周期的影响 木文采用流式细胞仪分析了PLAB对HELA和SKOV3细 胞周期移行的影响。经不同浓度的PLAB(0.25-8.Ogmol/L) 作用于细胞12.24小时，PLAB使细胞各时相都有所抑制的 同时，可使细胞周期阻断在Gz+M期。 4 PLAB诱导肿瘤细胞的凋亡 PLAB能够诱导HELA及SKOV3细胞凋亡。不同浓度的 PLAB(0.25-1.OPmol/L)作用于HELA和SKOV3细胞24小 时后，用荧光染料Hoechst33342对细胞进行染色，在紫外光 激发下发蓝色荧光，荧光显微镜下观察发现PLAB叮使细胞 核染色质发生聚集、碎裂，细胞核固缩呈均一的致密物，进 而断裂，细胞膜不断出芽、脱落，、细胞变成数个大小不等的 凋亡小体，并且随着PLAB浓度的加大，镜下这种细胞形态 的变化愈来愈明显，表明凋亡细胞的比例逐渐增加。在DNA 凝胶电泳实验中，用不同浓度的PLAB(0.25一1.O[mol/L) 作用于HELA和$KOV3细胞24小时，提取DNA进行琼脂糖凝 胶电泳，呈现典型的D“NA梯子，，(DNAladder)。流式细胞仪 进行细胞的DNA含量测定，可见经不同浓度的PLAB(0.25 8.Ogmol/L)作用于HELA和SKOV3细胞24小时后，二者均出 现一个`G‘,亚峰”，且凋亡细胞的比例随着PLAB浓度的升高 而增加，呈一定的剂量依赖性。从以_卜三方面的结果可以认 为PLAB能够诱导肿瘤细胞的凋亡。 z 中文 摘 要 5PLAB对凋亡相关基因p53,bcl-2的蛋白表达及凋亡 相关蛋白caspase-3的影响 本文观察了PLAB对凋亡相关基因p53,bcl-2的蛋白表达 的影响。经不同浓度的PLAB(0.25.1.Opmo1/L)作用于HELA 和SKOV3细胞24小时，westernblot结果显示PLAB可使Bcl-2 蛋白的表达量降低，且呈一定的剂量依赖性，同时增加P53 蛋白的表达