骨髓间充质干细胞联合异体骨治疗蒙古羊胫骨缺损的实验研究.pdf

摘 要 目的：本实验选用体外分离培养的蒙古羊骨髓间充质干细胞接种贴附 到同种异体骨上形成载体复合物，植入蒙古羊体内胫骨缺损处，观察细胞一 异体骨复合物修复蒙古羊胫骨缺损的疗效，为骨组织工程治疗骨缺损的临 床应用提供实验依据。 方法：2只1月龄的蒙古羊，在严格无菌条件下穿刺收集股骨骨髓5ml， 采用联合培养法分离纯化骨髓间充质细胞，系统地研究其生物学特性以及 体外成骨能力。将骨髓间充质干细胞与处理为冻干骨的同种异体骨联合培 养24h，制成细胞一异体骨复合物后备用。 固定，胫骨处脱毛、碘酒消毒、铺无菌单。手术制造双侧胫骨1cm长的骨 一骨膜缺损区，．随机选择一侧作为实验组，植入骨髓间充质干细胞与同种 2 异体骨复合物：另一侧为对照组移植单纯同种异体骨。于术后4、8、1 周随机选取3只蒙古羊处死做微-CT检查及组织学观察。 结果：联合培养法分离得到较高纯度的骨髓间充质干细胞，且细胞形 态均一，呈成纤维细胞样，融合后形成明显的细胞生长纹路。骨髓问充质 干细胞经地塞米松等可以诱导分化为成骨细胞，碱性磷酸酶、茜素红染色 均为阳性。 2h、24h、 同种异体骨与骨髓间充质干细胞在体外分别联合培养2h、l 48h，经扫描电镜观察显示异体骨表面及其中心均有细胞贴附生长，且形态 多样。证明同种异体骨与骨髓间充质干细胞之间具有良好的相容性。 将9只蒙古羊随机分为三组，术后4、8、12周随机抽取一组宰杀取骨， 进行微-CT检查及组织学观察。结果显示，各个时期，实验组骨缺损修复 效果均优于对照组，骨痂形成量明显多于对照组。这些结果均表明细胞一 异体骨复合材料可以治疗蒙古羊胫骨缺损且效果优于单纯异体骨移植。 结论： 以作为种子细胞应用到骨组织工程学中。 2．BMSCs与同种异体骨具有良好的生物相容性，二者联合培养可以作 为临床治疗胫骨缺损的实验依据。 关键字：骨髓间充质干细胞；种子细胞；异体骨；骨组织工程；胫骨缺损 TreatmentofShinBoneDefectwithBone Allografl and Stem in MarrowCellMongolia Sheep ^bstract Treatmentofbonedefectisoneof difficult in subjectsorthopedicsurgery． Bone Marrow—derived Stem MesenchymalCells(BMSCs)fromMongolian asseed asacell then sheep cells，bone carrier，CO·cultured，and allograft invivoto shinbone the implantedcomposite repairsheep defects．Observing effectofbone withbonemarrowstem to allograft cellscure defect，and