岷江百合中黄瓜花叶病毒诱导的LrPR10的克隆及表达分析_张响玲.docVIP

园  艺  学  报  2014，41（6）：1218–1226  http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com  岷江百合中黄瓜花叶病毒诱导的 LrPR10 的克隆 及表达分析 张响玲，张延龙*，牛立新，孙道阳，梁振旭 （西北农林科技大学林学院，陕西杨凌 712100）  摘  要：为了研究黄瓜花叶病毒（CMV）诱导的岷江百合（Lilium regale）病程相关蛋白 PR10 基因 在抗病毒防御反应中的作用，对岷江百合叶片接种 CMV，采用 RACE 技术获得岷江百合 LrPR10 的全长 cDNA 序列，并对其进行生物信息学分析；利用实时荧光定量 PCR 对 LrPR10 在各器官特异性以及 CMV 和水杨酸（SA）处理后的表达模式进行了测定分析。结果表明：LrPR10 全长 756 bp，可编码由 157 个氨 基酸组成的蛋白质，该蛋白具有病程相关蛋白典型的 Bet_v1_like 保守结构域；LrPR10 在岷江百合鳞茎中 相对表达量最高，在嫩叶中最低；该基因可以被 CMV 和 SA 诱导上调表达，岷江百合、卷丹（L. lancifolium） 和宜昌百合（L. leucanthum）在 CMV 接种处理后 LrPR10 的相对表达量分别在 4 d、4 d 和 1 d 达到最大值， 分别为处理前的 58 倍、27 倍和 292 倍，在 SA 处理后 LrPR10 的相对表达量都在 8 h 达到最大值，分别为 处理前的 34 倍、8 倍和 38 倍。以上结果表明 LrPR10 在岷江百合抗黄瓜花叶病毒防御反应过程中发挥作 用。 关键词：岷江百合；黄瓜花叶病毒；LrPR10；RACE；表达分析 中图分类号：S 682.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1218-09  Cloning and Expression Analysis of LrPR10 Gene from Lilium regale Induced by Cucumber mosaic virus ZHANG Xiang-ling，ZHANG Yan-long*，NIU Li-xin，SUN Dao-yang，and LIANG Zhen-xu （College of Forestry，Northwest A F University，Yangling，Shaanxi 712100，China） Abstract：This study aimed to clone PR10 gene which was up-regulated in the leaves of Lilium regale infected by Cucumber mosaic virus（CMV）and examine the role of PR10 gene in defense response against CMV. The full length of LrPR10 was amplified by RACE and analyzed with bioinformatics tools. Real-time PCR was performed to check the transcript levels of LrPR10 in different organs of L. regale， CMV-inoculated and salicylic acid（SA）–treated leaves. The results showed that the length of complete cDNA of LrPR10 was 756 bp，which encoded 157 amino acids consisting of a Bet_v1_like conserved domain of pathogenesis-related proteins. The transcript level of LrPR10 was the highest in bulbs，whereas the lowest in tender leaves. LrPR10 was significantly induced by CMV inoculation and SA treatment. Transcript level of LrPR10 reached a peak at 4 d，4 d and 1d in the CMV-inoculated leaves of L. regale， 收稿日期：2013–1