用杆状病毒表达载体在家蚕中表达犬_干扰素及产物的抗病毒活性_王智权.docVIP

2014，40（3）： 0488 － 0492 ISSN 0257 － 4799； CN 32 － 1115 / S E-mail： CYKE@ chinajournal． net． cn 用杆状病毒表达载体在家蚕中表达犬 γ 干扰素及产物的抗病 毒活性  王智权  1，3  李轶女  2  张志芳  2  易咏竹  3  1  （ 1 甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；  2  中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081；  3  中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江 212018）  摘  要  利用杆状病毒表达载体在家蚕 5 龄幼虫体内高效表达犬 γ 干扰素（ CaIFNγ） 。将优化、合成的犬 γ 干扰素基因克隆 到杆状病毒转移载体 pVL1393 的多角体蛋白基因启动子下游，与 orf1629 基因缺损的亲本病毒 Bm-Bacmid DNA 共转染 BmN 细胞进行同源重组，将获得的重组病毒接种家蚕 5 龄幼虫。Western blot 检测感病幼虫的血淋巴中有分子质量约 19 kD 的目 6 研究结果为进一步研究犬 γ 干扰素的抗病毒活性和利用家蚕生物反应器生产犬 γ 干扰素奠定了一定的基础。 关键词 家蚕杆状病毒表达系统； 犬 γ 干扰素； 抗病毒活性 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 0257 － 4799（2014）03 － 0488 － 05 DOI:10.13441/j.cnki.cykx.2014.03.018 Expression and Antiviral Activity of Canine Interferon-γ Expressed in Silkw orm Baculovirus Expression System  WANG Zhi-Quan1，3  LI Yi-Nü2  ZHANG Zhi-Fang 2  YI Yong-Zhu3  WU Ｒun1 * 1 tute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081，China； 3 The Sericultural Ｒesearch Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Zhenjiang Jiangsu 212018，China）  Abstract  Canine interferon-gamma （ CaIFNγ） was expressed efficiently in the 5th instar silkworm （ Bombyx mori） larvae by baculovirus expression vector． Optimized canine interferon γ gene was artificially synthesized and cloned into transfer vector pVL1393 to construct the recombinant plasmid pVL-CaIFNγ under control of polyhedron genes promoter． pVL- CaIFNγ and orf1629-defective Bm-Bacmid DNA were co-transfected into BmN cells for homologous recombination． The re- combinant virus was harvested and used to inoculate silkworm larvae of the 5th instar． Western blot assay showed that the target protein was detected in hemolymph of the infected silkworm larvae and its molecular weight was about 19 kD． The recombinant CaIFNγ expressed in silkworm hemolymph was further verified to have antiviral activity by mini-cytopathic effect inhibition assay using the MDCK / VSV-GFP system，with a titer as high as 5 ×10 6 U / mL． This result provides a relia- bl