临床研究Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用.pdfVIP

·654 · doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2013.05.07 J South Med Univ, 2013, 33(5): 654-660 临床研究 Hsa-miR-Hsa-miR-186186在结肠癌细胞中的表达及作用在结肠癌细胞中的表达及作用 陈 芳，周 畅，陆艳霞，袁 理，彭璠莉，郑 林，李学农 南方医科大学基础医学院病理学系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室，广东 广州 510515 摘要：目的检测hsa-miR- 186在结肠癌组织及细胞中的表达，探讨hsa-mir- 186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法 应用实时荧光定量PCR 检测了miR- 186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5 株结肠癌细胞中的表达情况；扩增包含 miR- 186前体序列在内的基因片段，并将其克隆至PLVTHM 载体，将PLVTHM- miR 186质粒转染SW620 细胞，流式分选慢病 毒感染的SW620 细胞；CCK-8法、划痕实验和Transwell 检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot 检测靶基因 YY 1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比，12例癌组织中miR- 186 的平均表达量为0.0024± 0.0027 ，显著低于癌旁组织的 0.066± 0.068 ，P=0.008 ；miR- 186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620 和LOVO 相对表达量分别为0.118± 0.138 和0.157± 0.001 ，与在低转移潜能HT-29 细胞中表达量 1.000 ± 0.00 ，差异具有统计学意义P0.05 ；质粒双酶切及测序鉴定 PLVTHM-hsa-miR 186重组质粒构建成功；荧光定量PCR 表明稳定过表达miR- 186 的结肠癌细胞株SW620 构建成功，且过表达 miR- 186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力，差异均具有统计学意义P0.05。稳定过表达miR- 186 的细胞中，miR- 186 的表 达明显高于对照组和未处理组，YY 1蛋白质水平有所下降。结论 hsa-miR- 186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细 胞SW620、LOVO 中低表达，具有类似抑癌基因的作用；成功构建PLVTHM-miR 186慢病毒重组质粒，并稳定转染结肠癌细胞 SW620 ，抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR- 186调控YY 1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。 关键词：结肠癌细胞；hsa-miR- 186；慢病毒；增殖；迁移；侵袭 Expression of hsa-miR-186 and its role in human colon carcinoma cells CHEN Fang, ZHOU chang, LU Yanxia, YUAN Li , PENG Fanli, ZHENG Lin, LI Xuenong Department of Pathology and Guangdong Provincial Key Laboratory of Molecular Tumor Pathology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To explore the expression of hsa-mir-186 in colorectal cancer and study its role in regulating the biological behaviors of human colorectal cancer SW620 cells in vitro. Methods The expression of hsa-miR-186 in colon cancer tissue and the adjacent tissues as well as 5 colon carcinoma cells were analyzed using real-time quantitative RT-PCR. The precursor sequence of miR-186 gene was amplified from the genomic DNA by PCR and c