小鼠SMCY重组蛋白及抗H-Y抗原抗体IgY的纯化.pdfVIP

Dissertation for MSc Degree of Shanghai Jiao Tong University THE PURIFICATION of MOUSE SMCY RECOMBINED PROTEIN AND IgY MS. Candidate: Bencheng Liu Supervisor: Professor Zhongdong Qiao Department: Biochemistry and Molecular Biology Shanghai Jiao Tong University June 2008 小鼠 SMCY 重组蛋白及抗 H-Y 抗原 抗体 IgY 的纯化 摘 要 提取经雄性动物细胞免疫后的雌性动物抗血清，得到的抗体纯度不高、效价 太低，无法用于 H-Y 抗原的进一步研究。本研究以 SMCY 重组蛋白代替雄性动物 细胞作为免疫材料，免疫隐性白母鸡，收集鸡蛋，PEG 6000 方法提取蛋黄中的 IgY 抗体。为了进一步得到高纯度的特异性抗 H-Y 抗原抗体，我们将 Ni-NTA 柱 纯化 N 端带有 6his-tag 标签的 SMCY 重组蛋白作为配基，偶联至 CNBr 活化的 Sepharose 4B制成亲和层析柱，分离纯化抗H-Y抗原的特异性抗体IgY。结果表 明，经 Ni-NTA 柱纯化后，SMCY 重组蛋白纯度从 28%达到 80%以上，制作成的亲 和层析柱纯化可以得到纯度高达 97%的抗 H-Y 抗原的特异性抗体 IgY。经雌、雄 小鼠肝脏细胞的免疫组化检测，荧光显微镜下能够观察到雄性小鼠肝脏细胞有强 烈荧光，而在雌小鼠肝脏细胞表面观察不到特异荧光。研究结果表明，SMCY 重 组蛋白具有H-Y抗原的免疫原性，能够代替雄性动物细胞作为免疫材料；Ni-NTA 柱纯化后的 SMCY 重组蛋白，可作为亲和配基制作亲和层析柱，用于纯化分离抗 H-Y 抗原的特异性抗体；IgY 技术生产的卵黄抗体中有较高含量的抗 H-Y 抗原的 特异性抗体；亲和层析纯化以后，得到的IgY抗体能够特异识别结合与雄性小鼠 肝脏细胞表面，对H-Y抗原具有很好的特异性。 关键词： H-Y SMCY 重组蛋白 Ni-NTA 亲和层析 Ig