甲基营养型菌株WGP35的筛选、鉴定及突变sdaA基因对其产L-丝氨酸的影响.pdfVIP

甲基营养型菌株WGP35的筛选、鉴定及突变s删基因对其 产L．丝氨酸的影响 摘要 甲基营养菌在自然界中的分布非常的广泛，它们具有独特的一碳 代谢途径，能够将自然界中取之不尽的一碳化合物如甲醇、甲醛等转 变为菌体自身所需的营养物质，同时又会产生多种有益的代谢副产物 L．丝氨酸、维生素B12、聚p羟基丁酸盐等。因此，深入研究甲基营养菌 具有重要的意义。 L．丝氨酸是一种具有重要作用的氨基酸，被广泛应用于制药、食 品、饲料、化妆品、农业等方面。全球每年L．丝氨酸的需求量很大， 但L．丝氨酸的工业化生产却很难。目前主要利用微生物发酵法生产 L．丝氨酸。 本实验从不同的环境中筛选到三株不同的甲基营养型菌株 WGP35、WGP07、WGMl6。通过对菌株的16SrDNA序列分析、形 态学观察及生理生化鉴定，将菌株WGP07归为副球菌∽阳∞cc淞)， 假单胞菌佛P砌聊D嬲)。三株菌都能够利用甲醇生产L．丝氨酸。 其中菌株wGP35的L一丝氨酸产量最高为2．5 m咖l。 s捌基因编码的丝氨酸脱水酶(L．SerDH)催化L．丝氨酸降解为丙 酮酸，是影响L．丝氨酸产量的关键因素。在本实验中突变菌株WGP35 的s删基因，研究其对菌株产L．丝氨酸的影响。根据GellBank中 PCR扩增 AP砌聊彻础p“矿池GB．1中的s捌基因序列设计引物， GB．1中的 sd锄的同源序列。测序结果发现与风Pz比幻垅D刀础p“删a s捌基因序列在核苷酸水平上有90％的同源性。利用自杀质粒 PKl8mob对菌株WGP35中的s捌基因进行定点突变，构建突变菌 基因突变后突变菌株较野生菌株比其L．丝氨酸的产量提高了16％。 关键词：甲基营养菌筛选鉴定L一丝氨酸s捌基因同源单 交换 ll ISOLATIONANDIDENTIFICATIONoFASTRAINoF METHYLOTROPHICBACTERIUMWGP35AND MUTANTGENESDAAFoRL．SERINEPRODUCTION ABSTRACT bactIeriaare in have MeⅡlylotrophic ubiquitIDusnan胎．They one-c砷onmetabolism caIl仃allsfomea of p砒icular pamway，mey l鹕e one-carbon iIl naturelil(emethanoland intothe compounds formaldehyde m心entsofthe a of suchas stl．ains，producingVarietyby—products vitaminB ands0 ithaS 12，poly．Bhydroxybu田rateon．Therefore． …■ ，- ， ， ．， 一。。一’一一一一7一’…。一 todo importantsignificaIlcemrther咖dy． L-serineisan is usedin iInportant锄inoacid，whichwid