四季杧AP1和SEP1同源基因克隆与表达分析.pdf

四季jf亡胪7和SEP7同源基因克隆与表达分析 摘要 孝亡果(M嘶旭批Linn．)是世界上重要的热带果树之一，也是广西主要热带 果树之一。彳PJ似咫翻上4J)与舾P』删三Z4尉砂同源基因在花器官的形成过程中起着 至关重要的作用。在拟南芥中，彳尸J与距PJ基因相互作用共同促进植株开花。本试验 从四季桩中分离克隆仰J『、舾PJ同源基因cDNA全长序列，并对其进行生物学信息分 析；同时初步比较了四季柁彳PJ『的2个同源基因、距PJ同源基因在不同组织器官中表 达以及在四季韦亡和紫花丰亡这两个品种表达的差异，以期了解四季)}亡开花的分子机制，为 进一步阐明四季丰亡的成花机理积累资料。主要研究结果如下： (1)卡亡果RNA提取方法的优化。本方法在前人的基础上进行了适当的优化改进，细 化了步骤，并能普遍适用于奉亡果不同组织RNA提取方法。采用优化后的RNA提取方法， 产率相对较高。所有样品均可用于I汀．PCR，并均能扩增出清晰的单一条带，该方法提 取的RNA完全适用于下一步分子生物学研究。 (2)桩果爿尸J同源基因cDNA全长序列的克隆及生物信息学分析。以四季柁花的 cDNA为模板，用彳尸，同源基因简并引物扩增，得到一条长度为950bp的特异条带。测 序后进行BlaSt检索，成功获得彳尸J的两个同源基因，被命名为朋黝尸J．，和』泼谢JPJ．2， 别与紫花孝亡的刎PJf．J和施尸J．2同源基因相对应。在核苷酸水平上，j幽尸j．J与 彪鲋P，．2核苷酸同源性为87％；；肋黝PJ『．．『与刎P，．1和刎尸J-2核苷酸同源性分别为 酸序列比对及系统进化树分析发现，四季柁彳尸，同源基因与其它植物彳PJ『同源基因具 有较高同源性，且此类基因含有两个保守的结构域，即MADS．box保守结构域与K．box 功能域。 为模板，用贬尹l同源基因简并引物扩增，得到一条长度约为900bp的特异条带。测序 后进行BlaSt检索，成功获得卡亡果距尸，同源基因，被命名为距P，，(GenB锄k登录号 为：HQ586001)。经过氨基酸序列比对及系统进化树分析发现，四季柁艘妒J同源基因与 其它物种的核苷酸序列同源性基本在70％以上，通过氨基酸同源性比对发现，柁果距Pj 基因与其它植物的S职J基因具有较高同源性，且此类基因含有两个保守的结构域，即 MADS．box保守结构域与K．box功能域。 彳尸，的2个同源基因以及距PJ『同源基因在不同器官中的表达水平，同时检测这些同源基 因在四季杜和紫花卡亡这两个品种表达的差异。结果分析表明，四季桩』恻尸J．J和脱对PJ．2 同源基因均在花和果实中表达，且在花中具有较高的表达量，在花后60天(坐果后期)表 达量明显高于花后20天(坐果初期)和花后40天(坐果中期)中的表达量。在营养生长调 控中，四季柁幼嫩组织中彳Pj同源基因具有较高的表达量，而在老叶中不表达。艇’P．f同 源基因在四季孝亡和紫花车亡的花器官中以及营养生长器官嫩叶、嫩茎、老叶、老茎中均有 表达。其中．’PJ『在老茎中微量表达，在花和老叶中的表达量较高。彳P，的2个同源基 因、艘汐J同源基因在四季柁与紫花杜中的表达模式相近。 关键词：四季卡亡；AJpj同源基因；s印j同源基因；cDNA克隆；表达分析 Ⅱ And Of彳朋And CloningExpressionAnalysis GeneIn Mango Gao Meiping of (College Abstl．act oft11e indica am锄bcrof one Mango(M锄百femLi皿．)is t11e加lacardiace解胁ily锄d moSt