猪鸡肠道益生菌株的分离鉴定及其抗TGEV和IBV的作用.pdfVIP

摘要 i． |曼曼曼璺皇量鼍I—iIiII；I 一 一 一一Ii—io舅曼曼曼!曼鼍曼皇曼量量鼍量 摘要 本实验从健康的雏鸡和仔猪盲肠中分离鉴定出三株益生菌，采用MTT和细胞病变方法， 抑制率的影响，探讨益生菌的抗病毒作用。 实验中首先利用革兰氏染色，生化试验，16SrRNA，抑菌试验等方法分离鉴定出了三株 L2一德氏乳杆菌乳亚种(Lactobaeillus．delbrueekiisubsplactis)和L3一德氏乳杆菌保加利亚亚种 (Laetobaeillusdelbrueckii subsp．bulgarieus)。利用MTT法测定益生菌处理后的细胞活性， 经统计分析得出益生菌对细胞的最大无毒浓度为L1株10¨efu／ml，L2株1012efu／ml，L3株 10呓cfu／ml，益生菌培养上清1；2的稀释液，益生菌灭活菌体和破碎菌体成分在实验浓度均 未显现细胞毒害现象。 根据上述实验结果开展下列益生菌的抗病毒作用研究。实验分组：第l组：益生菌与上 述2种细胞预先分别孵育后再攻毒：第2组：2种细胞感染病毒后再接入益生菌；第3组： 益生菌与病毒同时接入细胞；第4组：益生菌对照；第5组：病毒对照；第6组：正常细胞 对照。实验结果：以MTT法测定益生菌和病毒(TGEV和IBV)处理后的细胞活性，通过 公式计算病毒抑制率。结果表明，无论是在PK．15细胞上。还是在CEF细胞上，益生菌成分 和不同加入方式均可显著地提高益生菌对TGEV和IBV的抑制率(P0．05)，并且这种作 用具有量效关系和时效关系。 益生菌．细胞．病毒相互作用后的细胞病变结果显示，益生菌及其培养上清与TGEV和 IBV同时接入细胞可以极显著的阻碍TGEV和IBV引发的细胞病变，推测其可能具有直接 的杀灭病毒作用。在实验中，我们分别研究了益生菌活菌、培养上清、灭活菌体和破碎菌体 成分的抗病毒作用，结果表明，益生菌的各种形式均具有一定的抗病毒作用，但在效果上存 在一定的差异，原因可能是其抗病毒作用的机制不同。益生菌与细胞作用后再感染病毒，对 TGEV和IBV抑制率升高的结果反映出了益生菌对TGEV和IBV吸附细胞的阻断作用：从 益生菌与病毒同时接入细胞后降低病毒对细胞侵害的现象，可以看出益生菌可能对病毒具有 直接破坏作用；细胞感染病毒后再接入益生菌对TGEV和IBV抑制率极低的现象说明，病 毒感染后益生菌再很难发挥作用。 综上所述，在体外益生菌对TGEV和IBV细胞病变影响的实验中，所分离的三株益生 菌及其培养上清都极显著地阻碍了TGEV和IBV细胞病变程度，但各菌种之间存在程度不 同的差异；这～结果说明益生菌可能具有直接破坏病毒的作用，并且具有菌种特异性。初步 确定这三株益生菌具有抗病毒作用。益生菌菌株可以直接破坏TGEV和IBV。又可以阻断病 毒对细胞的感染、抑制病毒在细胞内的增殖。 关键词益生菌；分离鉴定：病毒抑制率：抗病毒作用 ABSTRACT {mmj I—— m,,． !皇曼曼曼曼皇曼鼍 and IntestinalTractProbioticsDisassociation andAntiviralofTGEVandIBV Identification Activity Abstract Inthe and threestrains fromcecumof identify probiotics healthy experiments，Bolting vitro chickenand MTTand in CEFandPK-15 you