水稻LRR型类受体蛋白激酶胞外区的原核表达及多克隆抗体制备.pdfVIP

Pa-pers 7，一《t’，一5，c……～一；一t∞，；*，一，，，A…+．。7…m·““-“o，，m—Research 。o。，一。自，—t；·”。。“7 PI：3留恭篆溺乞脚枷b www．pibb丑c．Cll 水稻LRR型类受体蛋白激酶胞外区的 原核表达及多克隆抗体制备· 程彦伟”李亮”沈嵘齐耀程刘晓宇王宁 张炜… (南京农业大学生命科学学院生物化学与分子生物学系， 南京农业大学G圯Healthcate Biosciences蛋白质组学合作示范实验室，南京210095) 摘要前期研究表明，水稻根尖细胞质膜类受体蛋白激酶OsRLK的表达受盐胁迫诱导．为了进一步研究该激酶的生理功能， 量约为细胞总蛋白的30％．重组蛋白经SDs．n崛E分离，染色切胶收集后，作为抗原免疫新西兰家兔，分离抗血清，经纯 化得到l：20000效价的多克隆抗体．Westernblot结果显示，该抗体能特异识别在原核表达系统内表达的抗原，以及水稻根 尖细胞质膜组分中的LRR型类受体蛋白激酶，并且在蛋白质水平证实该激酶为盐胁迫响应蛋白． 关键词LRR型类受体蛋白激酶，水稻，原核表达，多克隆抗体 学科分类号Q503，Q789 目前LRR型类受体蛋白激酶作为胁迫响应基 高等植物中的类受体蛋白激酶(receptor-like kinase，蚴是一类定位在质膜上，包含胞因参与植物细胞对生物和非生物逆境的应答及相关 protein 防御反应逐渐受到人们的关注．例如，水稻受体激 外结构域(extracellulardomain)、跨膜结构域 酶Xa21的胞外LRR结构与配基(水稻白叶枯病原 (transmembrandomain)和胞内激酶域(cytoplasmic ldnase protein domain)的膜蛋白．因为这类蛋白激菌的无毒基因产物1结合后能够诱导Xa2l胞内激 酶的分子结构和功能类似动物细胞中的受体蛋白激 酶自磷酸化，产生一系列细胞反应，保护水稻免受 kinase，RPK)【l~3】，并且绝大多数该病原菌的侵害ill，19]．这些结果提示LRR结构在其 酶(receptorprotein 尚未鉴定出其配基，故称之为类受体蛋白激酶闱． 与配基(病原体)结合时发挥重要的作用．对LRR 近年来发现的植物类受体蛋白激酶包括以下诸多成 型RL鼬响应非生物逆境的研究证明，水稻的LRR 员：拟南芥中的RPKl嘲、TMKl旧、T胍I，1川、型受体激酶OsRLKl基因可被低温和盐胁迫诱导表 CLvl～3嘲、FIDRl嘲和唧TA【l明， 水稻中的 Xa21【111、OsRI，K1【嘲、BⅪ1【埘，辣椒中的CALRRl[141不仅可以被炭疽病原菌诱导表达也可以在高盐、脱 等．目前，在高等植物中已鉴定的类受体蛋白激酶 落酸(ABA)和伤害等非生物胁迫条件下表达．由于 绝大多数属于富含亮氨酸重复序列(1eucine．rich多种非生物逆境如干旱、高盐和低温均可造成渗透 压的改变，因此有人认为非生物逆境下RLKs的诱 repeat．Ll佩)型【圈．LRR基序参与蛋白质与蛋白质 的相互作用，尤其在分子识别过程中，如信号转 导表达可能是通过渗透压途径而不是直接的胁迫反 导、细胞粘连、细胞发育、DNA修复和砌妊加工 应．从目前的研究现状看，对与植物抗病相关 过程中起重要作用【旧．LRR家族成员的胞内苏氨 U汛型RLKs的研究较为深入，而这类受体激酶对 酸／丝氨酸蛋白激酶区域保守性高，但胞外区域则 非生物逆境响应的生物学意义尚不明了． 在LRR重复序列的数目、长度及排列上