1.2基因工程的基本操作程序37032.pptVIP

pcr技术扩增目的基因与DNA复制的比较表 1.下列属于PCR技术的条件的是①单链的脱氧核苷酸序列引物 ②目的基因所在的DNA片段 ③脱氧核苷酸 ④核糖核苷酸⑤DNA连接酶 ⑥DNA聚合酶 ⑦DNA限制性内切酶 A.①②③⑤ B.①②③⑥ C.①②③⑤⑦ D.①②④⑤⑦ 2.下列有关PCR技术的叙述正确的是A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中D.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中 3、人工合成 ——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核糖核苷酸序列 结构基因的脱氧核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 人工合成：若基因_ ____，核苷酸序列又_____ ，可用此法。 较小 已知 1、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 A. 化学合成法? ? B.基因组文库法 C. cDNA文库法?? D. 聚合酶链反应 2、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ A D (二)基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的________切割质粒，使其出现一个切口，露出___________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 1.过程: 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 (获得目的基因) DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 经此过程，基因表达载体的构建就成功了？ 同一种 1.过程: 1. 目的基因与运载体结合所需的条件有 ①同一种限制酶 ②具有抗性基因的质粒 ③RNA聚合酶 ④目的基因 ⑤DNA连接酶 ⑥四种脱氧核苷酸 ⑦ATP A．①②③④⑤⑥⑦ B．①②④⑤⑥⑦ C．①②③④⑤ D．①②④⑤⑦ D 2、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。 3.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 1、（多选）一个基因表达载体的构建应包括 A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．标记基因 ABCD 2、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码 B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用 C．标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选 D．基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别 A 转化 —— 方法 ①将目的基因导入植物细胞 ②将目的基因导入动物细胞 ③将目的基因导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 三、将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细