感染兔出血症病毒兔肝组织蛋白表达差异研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 感染兔出血症病毒兔肝组织蛋白表达差异研究 李茂中，刘家森，王泽祥，孙宏勇，郭东春，姜 骞，林 欢，曲连东幸 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／实验动物研究室，黑龙江哈尔滨150001) 摘要：提取感染组和对照组的兔肝脏总蛋白，采用双向凝胶电泳技术比较分析差异表达蛋白；经 具有统计学意义的表达差异蛋白点，其中19个在感染中表达上调，41个表达下调。通过比较人工感染兔出血热 病毒(RHDV)组和对照组兔肝脏整体蛋白表达谱，筛选出了5种可能在病毒整个感染过程中起作用的差异蛋 白。 关键词：兔出血症病毒；双向凝胶电泳；蛋白质组学 剂盒、蛋白酶抑制剂、核酸酶混合物、低熔点琼脂 兔出血症(Rabbithemorrhagicdisease，RHD)是由 disease 糖、考马斯亮蓝R350购于GEHealthcare公司。丙 virus， 兔出血症病毒(Rabbithemorrhagic RHDV)引起的危害3月龄以上青年兔和成年兔的一烯酰胺购自Promeg公司。甲叉双丙烯酰胺、十二烷 种急性、烈性、高度接触性传染病。从1984年基磺酸钠、过硫酸铵、四甲基乙二胺(TEMED)、 RHD首次报道至今，关于RHDV的研究已经取得 了很大的发展fl】。在RHD的发生发展过程中，肝脏IPGphor 是病毒增殖的主要器官【2】。由于可用于培养繁殖 III图像扫描仪、紫外分 SE600Ruby、ImageScanner 2D RHDV细胞系的缺失，限制了对RHDV病毒感染机光光度仪(Nano MasterPlat Drop一1000)、Image inumversion 制的研究，RHDV致病的分子机理至今仍不十分清 6．0分析软件为GEHealthcare公司产 楚。本实验应用双向凝胶电泳比较感染后肝脏表达 品。 1 蛋白的差异，在蛋白质整体水平上分析RHDV感染1．3样品的制备和定量提取正常肝脏组织及21 后兔肝脏蛋白表达的差异，从差异蛋白及其功能角度 血凝单位RHDV攻毒死亡的兔肝脏组织各100 mg， 着手，为研究RHDV感染机制奠定了基础。 剪碎，置于研钵中，加液氮研磨后，加入裂解液孵 育振荡，离心后吸取上清，然后采用GE公司的 2D．clean 1 材料和方法 up纯化试剂盒对上述粗提蛋白样品进行纯 化，其步骤按说明书进行。纯化完毕后采用GE公 1．1 Kit蛋白定量试剂盒对纯化蛋白样品 司的2D．Quant 病毒和实验动物RHDV(HYD株)由本实验室 保存，SPF兔由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 进行浓度测定。