鸡α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒效果研究.pdfVIP

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2017-09-04 发布于安徽
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鸡α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒效果研究.pdf

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卷期生物工程学报 !! ’( )!! *’ ) 年月 !##$ % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-.,/0,1 !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 鸡干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究 ! ， !#$%$ ’(#)*(+#,%- ./0(122%#$ #3 !4%-)1$ 5$,1(31(#$6! 71$1 *$8 9,:8+ #$ ;$,%%(* .331-, #3 =1-#?%$*$, !4%-)1$ 5$,1(31(#$6! 韦琴，彭贵青，金梅林，朱裕东，周红波，郭红燕，陈焕春，，，，， JFK L4 MF*N N@4DL4? OK* 9,4DP4 QRS T@DU’? QRVS R’?DW’ NSV R’?DT: :6 RF* R@:DA@ 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病毒室，武汉 8X##E# ，，，， 3+4 (- 5$#6+, 7#*) 8/+/% 9%2 3+4(*+/(*2 (- 51*#0),/)*+, :#0*(4#(,(12 ;)+($1 51*#0),/)*+, =$#%*#/2 ?)+$ 8X##E# !#$+ 摘要通过从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡干扰素（）全长基因。序列分析表明基因全长 M2 ! AKY*D! AKY*D! ，亚克隆其成熟蛋白编码基因（），利用基因重组技术构建了（），使置于的启 C!0- 8C%0- @ ) 0(,#Z -FBD!C: [ DKY*! KY*D! -FBD!C: BE 动子下游并同（多聚组氨酸标签）融合。经酶切鉴定，测序证实重组质粒构建正确；将重组质粒转化大肠杆菌 $ \ R4= DB:? U*7 （），诱导表达，，分析证实表达出左右的融合蛋白，表达的蛋白以不溶性的包涵体形式 WP!] UFX KMBN +U+DM7NF J,=.,1D0(’. !!^U 存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达E# _ 以上，用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到% _ 。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制R%*! 禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好：在 R%*! 禽流感病毒攻毒组中，能保护鸡胚并使其孵出率达到的重组干扰素最小蛋白含量为；重组干扰素对新城疫病毒复制也有一 ]## _ ! ?