蛋白质含量测定中比较的研究.pptVIP

甲醛比色法和凯氏定氮法在圆口铜鱼鱼体蛋白质含量测定中的比较研究 答 辩 人 ：杨娟娟 研究意义 试验材料及处理 圆口铜鱼，隶属于鲤科铜鱼属, 是长江上游的主要经济鱼类之一。 本试验所用圆口铜鱼，是2007年8月在长江干流木洞江段，随机采集的幼鱼，按体长分为5组，在70℃下烘至恒重, 求得其含水量(WAT)，然后研磨成沫，于- 20℃下保存待测。 实验原理 凯氏定氮法 有机物与硫酸共热，其中的氮转化为硫酸 铵，然后测定氮量，再乘以系数6.25，即为蛋白 质含量。分为消化，蒸馏和滴定三步。 2.甲醛比色法原理 样品与浓硫酸共热消化，其中的氮转化为硫酸铵 。在PH4.8的乙酸钠—乙酸缓冲溶液中，铵与乙酰丙酮和甲醛反应，生成黄色的吡啶化合物。在波长400nm处测定吸光值，代入标准曲线，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量 。 讨论 一 两种方法的相似处 1.间接测量 2.消化过程相同 二 优劣比较 1.甲醛法操作更简便。 2.甲醛法可大批量测定样品蛋白含量。 3.凯氏法测量的精确性，可重复性更强。 4.凯氏法应用广泛性更强。 请各位老师批评指正！ * * 指导教师：张昊星 研究背景 研究目的及意义 试验材料及处理 实验原理 研究方法 数据处理 讨论 研究背景 蛋白质的定量测定，是生化研究的一个基本环节。由于在不同生物体和组织中，蛋白质的种类和含量有明显的差异，它们对蛋白质的测定方法也有不同的要求。凯氏定氮法是一种基本方法,其测定结果稳定、准确,被国内外广泛采用。但此法操作繁琐,试剂消耗量大, 有待改进。 本研究中对三峡库区鱼种——圆口铜鱼按照体长分组，运用凯氏定氮法和甲醛法测其蛋白质含量。然后比较其结果，检验甲醛法是否能够用来测定鱼体蛋白含量。以期选择一种科学、简便、快速、灵敏的鱼体蛋白测定方法。 研究方法： 1. 对圆口铜鱼分组 2. 用凯氏定氮法和甲醛比色法测鱼体 的蛋白含量 3. 配对t检验其结果的差异性。 甲醛比色法标准曲线 实验结果 0.422 15.33+0.76 16.44+0.67 5（120~169） 0. 337 13.54+1.0 14.68+0.10 4（71~79） 0.053 12.82+0.48 14.14+0.25 3（61~69） 0.062 12.85+0.41 14.37+0.21 2（51~60） 0.434 13.37+1.0 14.15+0.27 1（40~50） P（paired t-test） 蛋白质含量（甲醛比色）Mean+SE 蛋白质含量（凯氏定氮）Mean+SE 体长组（mm） 结论: 在不同体长组中，甲醛比色法与凯氏定氮法 测定结果均未达到显著性水平，说明在本研究 的条件下，两种方法的测定结果均适宜于下一 步的研究。 *