准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子的克隆及其活性功能初步检测.pdfVIP

HEREDITAS (Beijing) 2009 10 , 31(10): 1029―1036 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2009.01029 准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子的克隆及其活性 功能初步检测 1 1 2 3 2 胡文革 , 郝凤霞 , 陈创夫 , 王远志 , 任艳 1. , 832003; 2. , 832003; 3. , 832003 以开发利用新疆濒危鱼类准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)基因资源为研究目的, 利用 PCR 技术克 隆准噶尔雅罗鱼的β-actin 基因, 得到的β-actin 基因片段 SZ21 包含启动调控区, 大小为2 398 bp 。SZ21 的启 动调控区包括β-actin 基因上游调控序列、第 1、第2 、第3 和第4 外显子部分序列。上游调控序列中含有对转 录起重要作用的CAAT 框、TATA 框和CArG 框等元件。对启动子序列在线分析表明, 获得的启动子含有E-box 、 RU49 、ZBPF 、CEBP 、CREB 等多个重要转录因子结合位点。用Aat Ⅱ破坏真核表达载体 pEGFP-N1-AFPⅢ中 的CMV 启动子, 将准噶尔雅罗鱼的SZ21 启动调控区克隆到载体pEGFP-N1-AFPⅢ(CMV 坏)上, 构建成重组表 达载体 β2 pEGFP-N1-AFPⅢ。脂质体转染BHK-21 细胞。结果表明, 克隆的准噶尔雅罗鱼β-actin 基因启动子 SZ21 具有启动EGFP 报告基因在哺乳动物细胞中表达的活性。通过BHK-21 绿色荧光细胞的传代证实, 克隆的 启动子具有持续启动蛋白基因表达的活性, 在细胞传代中可以遗传。PCR 检测传代的BHK-21 绿色荧光细胞基 因组DNA, 均能检测到SZ21 目的片段。文章成功分离了具有活性功能的准噶尔雅罗鱼β-actin 基因启动子。 准噶尔雅罗鱼; β-肌动蛋白启动子; 脂质体转染; BHK-21 细胞; 活性功能 Cloning of the promoter region of Leuciscus Merzbacheri β-actin gene and detection of its function 1 1 2 3 2 HU Wen-Ge , HAO Feng-Xia , CHEN Chuang-Fu , WANG Yuan-Zhi , REN Yan 1. Life-Science College, Shihezi University, Shihezi 832003, Xinjiang , China; 2. Animal Science and Technology College , Shihezi University, Shihezi 832003, Xinjiang , China; 3. Medicine College, Shihezi University, Shihezi 832003, Xinjiang , China Abstract: To utilize the gene resources of Leuciscus merzbacheri , a 2 398 bp (SZ21) DNA fragment including the 5 - flanking region and partial open reading frame of the β-actin gene was obtained through PCR