组织凝集素在人染色体上的基因定位.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)18(5):36-381996 组织凝集素在人染色体上的基因定位 吴秋茜 蒋盘宏 北（京化学试剂研究所生化试剂高技术实验室，北京 100022) 摘 要 本文用非放射性DIG标记组织凝集素基因探针研究其在人染色体上的基因定位，首先对基因原 位杂交条件进行了一系列研究．结果表明采用染色体温和变性、基因片段探针等为较好的基因原位杂交 条件，通过 135个细胞中期相的分析结果显示，杂交阳性率为20%，本底为2.81，杂交点分布峰位于 3q12-13. 关健词 非放射性标记，组织凝集素，人染色体，原位杂交 LocalizationofSarcolectinGeneonHumanChromosome WuQiugian JiangPanhong (BiochemicalLaboratory,InstituteofChemicalReagent,Beijing100022) Abstract Thelocalizationofsarcolectingeneonhumanchromosomeisstudied.Amodifiedsystemofin situ hybridizationwasdeveloped.A specificsignalwasgeneratedbyemployinganonradioactive DIG-labelledgenefragmentasaprobeincombinationwiththehybridizationbuffercontainingno dextransulphateandsoftlydenaturedchromosomes.Usingthissystem,uniquesequenceforsarcolectinas smallas0.65kbwasdetectableandobservedat3812-13.Of135metaphasesexamined,27(20%)hadat leastonegraindepositedon3g12-13,andthebac垅randwas2.81. Keywords Nonradioactivelabelling,insituhybridization,Sarcolectin,Humanchromosome 组织凝集素是一种内源性凝集素，它具有多种生物学功能：凝集多种正常的和转化的细胞，其凝集细胞的活 性可被特异性单糖所抑制 ’（。）；降解由干扰素诱导的抗病毒作用 二〔”；刺激细胞增殖(4)，并在免疫调节机理 中起重要作用。此外，组织凝集素与诸多的细胞因子如干扰素等有着错综复杂的内在关系．因此，研究它在人染 色体上的基因定位有助于从基因水平探讨其作用机理．本文对组织凝集素在人染色体上的基因定位进行了研究． 1材 料 与 方 法 1.1材料 组织凝集素基因亚克隆质粒，由Chany教授提供，DiG标记试剂盒购自德国Boehringer公司，硝酸纤维素 膜，蛙精DNA，盐酸呱以及甲酞胺购自美国Promega公司，EcoRI,RNAase为Pharmacia产品，人胚肺二倍 体细胞2（BS)由生物制品研究所提供． 1.2方法 1.2.1质粒DNA的提取和插人片段的回收 Bluescript重组质粒含有0.65kb的组织凝集素基因片段．质粒的 提取采用碱裂解法．纯化后的质粒DNA经EcoRI酶切电泳后，采用硝酸纤维素膜离心法 ”（回收DNA片段． 1.2.2DiG标记探针的制备 按DiG标记试剂盒使用说明． 1.2.3斑点杂交 按常规方法进行． 5期 吴秋茜等：组织凝集素在人染色体上的基因定位 37 1.2.4中期染色体制备 采用20-30代人胚肺二倍体细胞培养约40小时，经低渗处理后，用甲醇：冰乙酸(3（ 1)固定晾干后备用． 1.2.5G一显带 按常规方法进行． 1.2.6原位杂交 按Garson方法⑥． 2结 果 与 讨 论 2.1探针的DiG标记率和敏感性 以试剂盒提供的阳性对照为计算标准，当标记底物浓度为3tigDNA/20川反应体积时，标记率为7%．可 检出的最大稀释倍数约