中华眼镜蛇短链神经毒素cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

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2017-09-04 发布于北京
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中华眼镜蛇短链神经毒素cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达.pdf

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遗传HEREDITAS(Beijing)21(5):1一41999 ·_VP C5 乡民告 · 中华眼镜蛇短链神经毒素cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达① 蔡勤，‘何志勇，2龚毅，，杨胜利 ‘ 门．中国科学院上海生物工程研究中心，上海200233; 2．上海交通大学生物科学与技术系，上海 200240) 摘要：利用RT-PCR技术从中华眼镜蛇毒腺组织中成功地克隆了短链神经毒素cDNA,测序结果表明，该基因开放阅读框架编码83个氨基酸残基，其中21个为信号肤，成熟肚为62个氨基酸残基。该基因与GenBank报道的相同物种的神经毒素基因有相当的同源性，不同物种之间的信号肤序列十分保守将短链神经毒素cDNA再经PCR扩增除去信号肤序列，克隆到pT7ZZ表达质粒中，转化E.coli BL21(DE3）后，经IPTG诱导可高效表达分子量为23kDa②左右的融合蛋白表达产物占菌体总蛋白的 25％左右关键词：神经毒素；RT-PCR；表达中图分类号：Q75,Q812 文献标识码：A 文章编号：0253-9772(1999)05-0001-04 CloningandExpressionofaShort-chainNeurotoxinfrom ChineseCobrainEscherichiacoli CAIQin,HEZhi-yong,zGONGYi,YANGSheng-h (1．ShanghaiResearchCenterofBiotechnology,TheChineseAcademyofSciences,Shanghai200233,China; 2.DepartmentofBioscienceandBiotechnology,ShanghaiJiao-TongUniversity200240,China) Abstract: Anovelshort-chainneurotoxincDNAwasclonedfromChinesecobravenombyRT-PCR. ThecDNAwasclonedintothe冈EM一 vectorandsequenced.IthasaORFencoding83aminoacidresi- duesanda21residuessignalpeptide.ThisneurotoxingeneofChinesecobrawashighlyhomogeneousto theshort-chainneurotoxingeneofsimilars‘peciesreportedinGenBank.Amongthegenesofneurotoxin fromdifferentspecies,thesignalpeptideswereveryconserved.ThecDNAencodingthematurepeptide wasamplifiedbyPCRandwasclonedintopT7ZZvector.Therecombinantvectorwastransformedinto E.coliBL2(DE3).TheE.colihighlyexpressedthefusionproteinwhosemollecularweightis23kDa,af- terinducedby0.1mol/LIPTG.Theexpressedproteinwasaccumulateduptomorethan25%oftotal bacterialprotein. keywords:Neurotoxin:RT-PCR;Expression ①收稿日期：1998-09-21，修订日期：1999-02-03 作者简介：蔡勤，男，34岁，博士研究生，工程师，专业方向为分子遗传学。E-mail:caigin(a)guomai.sh.cn Tel:021 ②1Da一lu(原子质量单位，下同）。 2 遗传 HEREDITAS(Beijing)1999