植物基因工程进展.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(B丝丝ng2二坚 (4) 45- 48 1991 植 物 基 因 工 程 进 展 程 玉 忠 （山东农业大学农学系，泰安,271018) 70年代末，科学家通过分子生物学的研究证实， chainreaction,简称 PCR）技术能把单个目的基 因 根癌农杆菌 (Agrobacteriumtume}aciens)侵染了双 大量扩增，供基因工程工作使用。这种方法的原理是： 子叶植物之后，能把它的质粒 (Tumorinducingpla- 先使一个基因的5’端与另一个基因的31端都具有顺序 smid，简称Ti质粒）上的一段DNA(TransferDNA, 相同的一段DNA序列，然后经变性退火，使这两个不 简称T-DNA)插入到植物染色体中，使植物产生冠 同基因的两条链的同源部分配对，再用 DNA多聚酶 廖瘤 (crowngall),T-DNA在冠瘦瘤细胞内能稳定 补成双链，然后用 PCR扩增，这种方法称为重叠寡聚 地遗传16‘,16,18,73,357。由此，人们设想用Ti质粒作为载 核昔酸法4‘’‘。它为大量获取目的基因提供了方便。 体把目的基因转移到要改良的植物中去。1983年 Fra- 目前国际上已经分离出来可供植物基因工程使用 ley等人”〔’首次用Ti质粒作为载体把细菌的卡那霉素 的目的基因已超过80个。 这些目的基因的表达产物 抗性基因插人到矮牵牛细胞中并成功表达。 1985年 有的能抵抗病害、虫害或除草剂，有的则能提高植物中 Horschts3发明了植物组织的叶圆盘 l（eafdisc）转 蛋白质或必需氨基酸的含量 ”‘。大部分目的基因是从 化法，这一方法简便易行，大大提高了植物遗传转化的 植物中分离出来的，有的则是来自动物或微生物，例如 效率。此后，植物基因工程迅速发展，在提高农作物产 从荧火虫中得到荧光酶基因川〔，从苏云金杆中得到抗 量和抗逆能力、改进作物品质等领域展示了诱人的前 虫基因，‘，’。 景。 把目的基因与合适的启动子连接后，即可导人受 植物基因工程的工作内容大致包括：目的基因的 体植物中去。目前植物基因工程中使用最多、作用最 分离、植物基因工程载体的构建、植物细胞的遗传转 强的一个启动子是花椰菜花叶病毒 C（aMv）的” “启 化、转化细胞的筛选和组织培养几个方面。本文讨论 动子 【”’，另一个常用的启动子是从Ti质粒的胭脂碱 植物基因工程在上述几个方面的重要研究进展和在作 合酶 (nopalinesynthase,简称Nos）基因中分离出 物育种上取得的最新成就。 来的No，启动子 ”〔’。 目的基因的分离 植物基因工程载体的构建 开展植物基因工程工作，首先要获得一些用来转 有了目的基因，接着便是把目的基因引入受体植 化植物的基因，即目的基因。一般获取 目的基因的 物中去，这一步工作大部分是用改造的Ti质粒作为载 方法是先建立植物的基因文库。基因文库有两种，即 体完成的。野生型Ti质粒太大 约（200k6)，很难进行 基因组文库 （genomiclibrary）和cDNA文库 c（DNA 遗传操作，并且它使被转化的植物组织长成瘤，因此它 library)．构建基因组文库常用的方法是，先提纯植物 不能直接作为载体使用。针对这些问题，人们对野生 的 DNA，再用限制性内切酶消化成具有一定长度的 型Ti质粒进行改造，去除了Ti质粒上 T-DNA区段 DNA片段，然后与又噬菌体 DNA载体 （或其他载体） 的致瘤基因，换上选择基因 如（ No‘基因，卡那霉素抗 连接，经体外包装，成为基因组文库。构建 。DNA文 性基因等），构建了许多植物基因工程载体，如 pGV 库的一般方法是，提纯植物 的 mRNA，反转录成 3850,Bin19等