植物基因工程研究的潜在受体— 甘蓝.pdfVIP

遗传学报，13(1);43-47}1986 Acta Genetica Sinica 植物基因工程研究的潜在受体— 甘蓝’‘ 蒋兴邮邵启全吴春法郑晓英2) （中国科学院遗传研究所，北京） 本文报道了3个致瘤农杆菌的菌株对4个甘蓝品种的致瘤作用。并从甘蓝的畸胎瘤的幼 苗叶片在无激素的 MS培养基上直接分化出幼苗和A208菌株诱导的报春甘蓝瘤组织上幼 苗叶片诱导出愈伤组织并分化出大量不定芽，再分化的幼苗和不定芽均含有胭脂碱。同时观 察了畸胎瘤上分化的幼苗长成植株、开花结实和整个生长期间胭脂碱含量的变化。说明了甘 蓝是研究基因工程的潜在的受体材料。 甘蓝 B（rassicaoleraceaL.）是一种常见的蔬菜，又是一种再生能力很强的植物。它 能被致瘤农杆菌 (AgrobacteriumtumefaciensConn)感染而形成冠廖瘤[53。本文作者利用 胭脂碱 n（opaline）型的致瘤农杆菌感染甘蓝，获得有分化能力的畸胎瘤，将这种瘤组织分 化的幼苗叶片在无激素的ms培养基上培养，在叶脉处能直接分化出幼苗。瘤组织及其 分化的小植株和由这种幼苗在无激素培养基上再分化的小植株的组织中均存在胭脂碱。 证明了致瘤农杆菌的 Ti质粒上的T区和甘蓝植株细胞的染色体组整合并能表达1110本 试验进一步研究了致瘤农杆菌的不同菌株对甘蓝的不同品种的致瘤作用，并从甘蓝的畸 胎瘤上幼苗的愈伤组织中诱导出大量含胭脂碱的不定芽。同时观察了畸胎瘤上分化的幼 苗长成植株，开花结实和整个生长时期胭脂碱含量的变化。说明了甘蓝可作为研究农作 物基因工程较好的受体材料。 材 料 和 方 法 供试的甘蓝材料为双金、晚丰、报春和京丰I号4个品种。1983年9月中旬播于温 室中，室温为20-250C，出苗后 15天植株长出2对真叶时进行致瘤农杆菌接种。 供试的致瘤农杆菌为 A208,C58和 B3/73三个菌株。菌液采用 YEB 细菌培养基 培养。接种后放置在28C0 温度条件下，80转／分往复式振荡器上培养36小时后供试验 用。致瘤农杆菌的菌液用注射针直接注射到甘蓝幼苗下胚轴部位。 甘蓝植株致瘤后，从瘤组织分化出幼苗的叶片用0.1务升汞液浸泡12分钟进行消毒， 用无菌水冲洗 ，次，经严格消毒的叶片切成 1.5厘米左右的小片放置在无激素．MS培养 基上培养。培养条件为室温 26--280C，每天光照9小时，光照强度为4,000Lux。接种 初期应及时淘汰污染的材料，使愈伤组织正常生长。 胭脂碱的测定：我们改进了Aerts[3，和 Otten(6，的微量纸电泳法。用0.2MNa2HP04, NaH2P041pH6.8的缓冲液直接提取需测定的组织。一般测定的材料为50毫克，加0.2 本文1984年4月17日收到；1985年1月29日收到修改稿。 1)实验得到美国密执安大学 Peter5.Carlson教授指导和提供部分试验药品；华盛顿大学 E.W.Nester教授 提供菌种；中国农科院蔬菜研究所提供甘蓝品种，在此一并致谢。 z}福建省龙溪地区农科所进修人员。 4呼 遗 传 学 报 13卷 毫升的缓冲液在微量玻璃匀浆器中充分研磨后，用4,000转／分离心机离心5分钟，再用 直径1毫米的毛细管吸取上清液滴于Whatman3号滤纸上。每个样品约2-3微升。滴 定点的直径以4毫米为佳。用甲酸：乙酸：水 （1:3:16）的电泳液进行纸电泳，电压为 400V，电泳时间为45分钟。电泳结束后将电泳纸晾干，用染色液染色。染色液的配方 为：甲液为0.2并菲醒纯酒精溶液；乙液为10务NaOH 的酒精 6（0多）溶液。染色时将甲 液和乙液等体积混合，将电泳纸在混合液中浸泡10秒钟，取出后再晾千，在暗室中用4w 的 254nm波长的紫外灯下观察并照相。 实 验 结 果 1．致瘤农杆菌不同菌株对几个甘蓝品种致瘤及幼苗分化能力的效应 A208,C58和B3/73三个菌株均属于胭脂碱型。在接种后15天，报春、双金、晚丰 及京丰1号4个甘蓝品种都能 100务 的感染而产生瘤组织。 这种瘤组织在1个月后都 能分化出幼苗，