野生大豆未成熟种子总mRNA的分离及其cDNA的分子克隆1).pdfVIP

遗 传 学 报， 16(3);167--7331969 ActaGeneticaSinica 野生大豆未成熟种子总mRNA的分离 及其cDNA的分子克隆，‘ 毕玉平2）米景九 郭静成 （北京农业大学生物学院） 用氯化铿沉淀法从野生大豆 G（.sofa）未成热种子中制备总 RNA7经 oligo(dT卜纤维 素柱亲和层析，获得总mRNA，在兔网织红细胞体系巾表现出一定翻译活性。以总mRN人为 模板，oligo(dT),,，．为引物，反转录酶催化合成第一链 cDNA,RNase1-1-DNA聚合酶 ［协 同合成第二链 。DNA。双链 cDN人的长度大约为200-5000hp，且不存在发夹结构。 将双 链 cDNA修补后钝端连接到 puc19质粒的Snla1位点，转化 E.coliJM107,获得800多 个白色重组子克隆。快速电泳检测及酶切分析表明，多数重组子带有插人片段，其中3个重组 子的插入片段长度大致为1700LIP,2600by和 1400bpo 关键词：野生大豆，mRNA,cDNA，克隆 野生大豆