囊胚细胞为媒体转基因鸡技术研究.pdf

摘要 本研究应用阳离子脂质体转染法、显微注射技术，利用携带报告基因 (EnhancedGreenFluorescent Protein，EGFP)的鸡囊胚细胞为供体初步建立 了转基因鸡模型，为利用转基因鸡作为生物反应器建立了一个技术平台。取得研 究成果如下： 1．鸡囊胚细胞体外培养时，添加10％的胎牛血清，细胞的贴壁率最高；M199、 EMDM两种细胞培养液对细胞贴壁率的影响差异不显著；培养时间为24h时细 胞的贴壁率最高；细胞贴壁率最高达60％左右。 2．鸡囊胚细胞体外转染时，贴壁细胞与悬浮细胞转染都可获得60％左右细胞的 瞬时表达；脂质体量为4腿，质粒DNA量为3腿时，转染自来航鸡原代囊胚 细胞的效率最高。 3．对受体种蛋进行显微注射时，种蛋赤道面开窗的孵化率最高，达26．74％；对 开窗种蛋采用四种不同材料封口，其中用蛋壳膜加封口胶进行封口的种蛋孵 化率最好，达27．08％；未开窗处理的种蛋与开窗处理的种蛋的孵化率有显著 差异(p0．05)；开窗处理的种蛋由于破坏了原来的结构，导致孵化率显著 降低。其中注射囊胚细胞的种蛋孵化率为28．43％。 4．对转基因鸡的胚胎及一周龄的小鸡进行荧光检测和PeR检测时，观察到弱的 绿色荧光，PcR检测也出现了阳性结果。 关键词：囊胚细胞增强型绿色荧光蛋白阳离子脂质体转基因 Abstract cationic transfection Adopting iiposome andmicroinjection established technique，wepreliminary chickenmodel．The transgenic donorsweusedwere blastodermalcellswhich enhanced carry green fluorescent researchisto protein(EGFP)gene．Theestablisha technical for platform chickenas usingtransgenic bioreactor．Themain research resultsareasfolIows： 1．When blastodermalcellsofchickenin culturing cell vitro，the attachmentrateismaximumwith10％fetalcalf serum．Thedifferences are two insignificamdifferentmediaM199and byusing EMDM．Thecell attachmentratewill reachthe aftercul 24hoursin