脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化临床观察.pdf

摘 要 肝硬化(hepatic cirrhosis)是由多种原因引起的肝脏损害，表现为肝细胞变性 坏死，纤维组织增生，肝细胞结节状再生，肝小叶结构变形，血液循环途径被改建， 最终导致肝硬化。根据病因分类，肝硬化主要有病毒性肝硬化、酒精性肝硬化、胆汁 性肝硬化、自身免疫性肝硬化及隐原性肝硬化等。我国以病毒性肝硬化为主，其中主 要为乙型肝炎病毒感染造成，很多病人无法长期规范化治疗最终致肝硬化。肝硬 化病人有门脉高压和肝功能障碍，病人常因消化道大出血和肝性脑病死亡。因此，肝 硬化治疗是一项长期艰巨的任务，有效的方法为肝移植，因肝脏供体少，临床工作难 以大量展开，越来越多的研究者致力于研究能替代肝移植的方法，间充质干细胞成为 新的方向。 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)属于干细胞家族，主要存在于骨 髓、脐带、脐血和胚胎中。因具有多向分化潜能、造血支持、免疫调控和自我复制等 特点，受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外诱导条件下可以分化为骨、软骨、 脂肪、肌肉、肌腱、神经、类肝细胞、心肌等组织细胞，连续传代后仍具有多向分化 潜能，可作为理想种子细胞用于炎症病变及衰老引起的器官修复。骨髓间充质干细胞 应用于临床较早，但抽取骨髓为有创性检查，增加了病人痛苦，越来越多的学者致力 于研究脐带来源的间充质干细胞。脐带间充质干细胞来源广泛，收集脐带为无创操作， 且治疗肝硬化有促进肝脏再生、提高患者生活质量的作用，在临床上应用越来越受到 重视。 目的：制备足月顺产胎儿脐带来源的间充质干细胞，探讨体外分离、培养、鉴定 方法，观察脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化的临床疗效。 方法：无菌条件下采集新生儿脐带，经过分离，培养获得间充质干细胞，流式细 胞仪表面抗原测定（CD29、CD105、CD34、CD45）；选择50例肝硬化患者，26例患者 在内科治疗基础上经前臂静脉或肝动脉插管进行MSCs移植，术后定期检测肝功能、凝 血功能及临床症状，并观察同期的症状体征和不良反应，同时随机选择24例仅以内科 治疗的肝硬化患者做为对照组，两组间进行比较。 结果： II (1) 培养的脐带间充质干细胞呈长梭形、旋涡状生长。P1代消化后传代，贴壁时 间约48h左右，2-3W长满80％。P6代以内的细胞增殖无明显差异。P3-P6代生长速度较 快，24h贴壁，48h长满70％，72h长满80％,P3-P6代内无明显分化。 (2) 细胞免疫表型显示表达间充质干细胞的特异性标记CD29；但不表达造血干细 胞表面标记CD34、CD45。这与骨髓间充质干细胞的表型一致。 (3) 脐带间充质干细胞移植后，治疗组ALB、PA 和Fbg 水平比对照组明显升高(P ﹤0.05),PT 时间与对照组相比明显降低 (P ﹤0.05)。 (4) 治疗组患者从治疗后1周开始，乏力、腹胀、纳差明显好转，12周后患者腹 水明显减少。26例移植患者术中未出现严重不良反应，无与移植相关的严重并发症。 结论： (1) 本实验用双酶消化法分离出间充质干细胞，经过冻存、复苏后细胞损伤小， 多次传代后细胞分化少，增殖能力稳定。 (2) 人脐带间充质干细胞经过流式细胞仪测定后，表达间充质干细胞的表型，不 表达造血干细胞表型，与骨髓来源的间充质干细胞检测一致。 (3) 人脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化，可提高患者ALB、PA、Fbg，缩短PT， 改善了患者的临床症状。 (4) 人脐带间充质干细胞移植肝硬化患者，具有良好的安全性。 关键词：脐带,间充质干细胞,移植,肝硬化 III ABSTRACT Hepatic cirrhosis are caused by a variety of liver damage, liver cells showing degeneration and necrosis, fibrosis, nodular regeneration, lobular architecture distortion, blood