生物样品中药物浓度HPLC-MS%2fMS测定及其药代动力学研究.pdf

及其药代动力学研究 硕士研究生1李国棵 导师：杨雪梅副教授 摘 要 目的 建立专属、灵敏的高效液相色谱．串联质谱(HPLC．MS／MS)法测定人血浆中 比伐卢定和人尿液中二甲双胍和罗格列酮的药物浓度，并研究其在人体内的药 物动力学特点。 方法 (1)测定人血浆中比伐卢定的浓度：①样品处理方法：向0．20mL血浆中分 别加入50灶甲醇，50肛L内标溶液(2．166pg／mL那法瑞林溶液)，涡旋30s混 匀；加600灿甲醇，涡旋30s混匀：离心10min(13000rpm)，取上清液40C氮 样分析。②质谱分析：比伐卢定和内标那法瑞林在正离子检测方式下，采用电 1091．0和 喷雾电离源(ESI源)，主要生成【M+H】+准分子离子，分别为rrdz m／z662．2。选择性对准分子离子[M+H】+进行产物离子全扫描分析，获得比伐卢 定的主要碎片为m／z650．3，响应较强，比较稳定且背景噪音低，因而被选作多 反应监测(MRM)定量的产物离子，用于定量分析。那法瑞林生成的主要碎片 离子为m／z328．7，将m／z328．7作为定量分析时监测的产物离子。③色谱条件为： ．本试验选定的色谱条件为：色谱柱：Zorbax 113111×2．1mlTl EclipseC18柱(50 I．D， 3．5 中文摘要 mL／min；柱温：40℃；进样量：5此。④受试者的选择：“申请药物临床试验报告、 试验方案、健康志愿者知情同意书”经药品临床研究基地医学伦理委员会批准。 选择健康志愿受试者30名，男女各半，年龄20～27岁，体重42--70 kg，签署 知情同意书，于试验前在医院接受全面的体格检查，对肝、肾功能进行化验测 定，并进行心电图检查，正常者方可入选。受试者无既往病史，平时很少服药， 不嗜烟酒，试验前14天内未用任何药物。临床试验在医院进行，采血期间禁烟 酒、咖啡因类饮料，避免剧烈运动。⑤给药方案及样品采集：30名受试者按性 别和登记顺序号分层随机分成低、中、高三组，每组各10人(男女各半)，晚 上统一进清淡饮食，于试验前一天晚8：00开始禁食，次日早上统一清淡饮食后， 定注射液，服药后2h内不得饮水，不得卧下，服药后2h可饮水，4h后统一进 O．75、l、1．5、2、3、4、5h肘静脉采血4mL，采集的血样置于肝素化的试管中， 分析：未知血浆样品的测定按“血浆样品的分析方法”项下操作，每天建立一条标 准曲线，同时分析低、中、高(双样本)的质控样品，并以同批的标准曲线计 算各时间点样品中比伐卢定浓度和质控样品的浓度，由QC样品的结果决定当日 数据的取舍，QC样品的相对偏差应在4-15％范围之内。⑦数据处理：将各受试 者不同时间样品的血药浓度数据及平均值与标准差列表并作图；然后分别对每 个受试者的血药浓度数据进行处理，进行有关药代动力学参数求算，并求出参 对数血药浓度一时间曲线末端直线部分的斜率求得。 mL (2)测定人尿液中二甲双胍和罗格列酮浓度：①样品处理方法：向O．20 0．1％甲酸的乙腈溶液，涡旋30s混匀；离 胍水溶液)，涡旋30s混匀；加400I-tL H 硕士学位论文 进样分析。②质谱分析：二甲双胍、罗格列酮和内标苯乙双胍在正离子检测模 358．2 130．1、