毛白杨形成层总蛋白裂解及蛋白含量测定方法优化.pdfVIP

第 36卷第 5期 河 北 农 业 大 学 学 报 Vo1．36NO．5 2013年 9月 J0URNAIOFAGRICULTURALUNIVERSITY OFHEBEI Sep．20 13 文章编号 ：1000—1573(2013)05—0060—05 毛 白杨形成层总蛋白裂解及蛋白含量测定方法优化 谢 进 ， 侯佳音， 刘淑欣， 蒋湘宁， 盖 颖 (北京林业大学 生物化学与技术学院，北京 100083) 摘 要 ：通过 TcA／丙酮法研磨提取获得毛 白杨形成层总蛋 白质粉末 。在室温和冰浴条件下 ，用不 同的裂解液 对粗提总蛋 白进行裂解 ，分别在 1，2及 3h取出裂解蛋 白液 。通过聚丙烯酰胺凝胶 电泳和双 向电泳对蛋 白质裂 解情况进行检测、比较与分析 ，获得 了蛋 白质最适裂解条件为 ：蛋 白裂解液 (8mol／L尿素，2mol／L硫脲 ，4 CHAPS，65mmo!／LDTT，2 Bio—lyte)在室温条件裂解 3h。同时对蛋 白质含量测定方法 一Bradford法及 2种 改 良的Bradford方法进行了比较，最终获得了用裂解缓冲液配制蛋 白质标准曲线系列溶液以降低本底干扰的优 化蛋白质含量测定方法 。 关 键 词 ：毛 白杨形成层；蛋 白裂解；含量测定；优化；双向电泳 中图分类号 ：$792．117 文献标志码 ：A Optim ization ofprotein lysisand determinationofprotein contentforPopulustomentosa cambium tissues XIEJin，HOU Jia-yin，LIU Shu—xing，GAIYing，JIANG Xiang-ning (CollegeofBiologicalSciencesandBiotechnology，BeijingForestryUniversity，Beijing100083，China) Abstract：TCA／acetonewasusedtoextracttotalcrudeproteinfrom cambium tissuesofPopu— lustomentosa．Sixkindsofproteinlysisbufferswereusedtodissolveandlysisthetotalprotein underroom temperatureand ice—bath，respectively．Lysisprocessesweremonitoredby sam— plingattheintervalof1，2and3h．ThesamplesweredeterminedandanalyzedwithSDS—poly— acrylamidegelelectrophoresisand the2-DE gelselectrophoresis．Optimallysisbufferwere composedof8mol／Lurea，2mol／Lthiourea，496／CHAPS，65mmol／LDTTand2％Bio—lyte andimproved lysiscondition were found to beatroom temperaturefor3 h．Comparison of Bradfordmethodwithtwootherimprovedmethodswasdoneforproteincontentdetermination andthebestoneistoreducethebackgroundinterferencebythepreparation ofBSA standard curvesolutionwiththelysisbuffer． Keywords：Populustomentosa cambium tissues；protein lysis；protein determination；2D-elec— tropho