毛白杨蔗糖合酶基因PtSS2克隆与表达分析.pdfVIP

西北植物学报 ，2013，33(8)：1501—1507 ActaBot．Borea1．-Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2013)081501—07 毛 白杨蔗糖合酶基因PtSS2克隆与表达分析 王 佳 ，季乐翔，陈 仲，叶梅霞，李 英，安新民 (北京林业 大学 生物科学与技术学院 ，北京 100083) 摘 要 ：为了解毛 白杨蔗糖合酶 (sucrosesynthase，SS)基 因功能和表达模式，以毛 白杨茎段来源 的cDNA为模板 ， 根据毛果杨 PtrSS2CDS序列信息设计特异引物 ，采用 RTPCR技术分离克隆了PISS2基 因。测序分析表 明， PtSS2基 因序列全长为 2412bp，编码 803个氨基酸 ，蛋 白大小为 92．14kD，理论等电点 6．O0，属于酸性蛋 白；氨基 酸序列 同源性分析表明，PtSS2与毛果杨 PtrSS2和 PtrSS1一致性分别高达 100 和 98．63 ；结构域分析表 明， PtSS2含有 2个高度保守的功能域 ，即蔗糖合酶 (5～552)和糖基化转移酶 (554～744)功能域 。qRT—PCR检测表 明，PtSS2在毛 白杨根、茎、叶、营养芽、雄雌花芽等各个组织中均有表达 ，但在营养芽和花芽 中表达量较高，根部相 对较低 ，总体呈组成型表达模式 ；在干旱胁迫下 ，PtSS2表达水平提升。研究结果推测 ，蔗糖合酶基 因PtSS2在毛 白杨各组织器 官发育过程及干旱胁迫 响应过程 中具有重要功能 。 关键词 ：毛 白杨 ；蔗糖合酶 ；实时定量 RT—PCR 中图分类号 ：Q785；Q786 文献标志码 ：A M olecularCloningandExpressionPatternsofPtSS2from Populustomentosa WANG Jia，jiLexiang，CHEN Zhong，YEMeixia，LIYing，AN Xinmin (CollegeofBiologicalSciencesandBiotechnology，BeijingForestryUniversity，Beijing100083，China) Abstract：Toinvestigatethefunctionandexpression patternsofsucrosesynthasegene，weusedcDNA re— versetranscriptfrom totalRNA ofstem tissueofPopulustomentosa asDNA template．Thespecific—prim— ersweredesignedaccordingtoPtrSS2CDSonPhytozomev9．0databaseforPCR amplification．These— quencingresultsindicatedthatPtSS2was2412bpinfulllengthwhichencodedaproteinof803aa．Itsmo— lecularweightandisoelectricpoint(pI)were92．14kD and6．00，respectively．Theresultshowedthatthe PtSS2inP．tomentosabelongedtoacidicprotein．ThededucedproteinsequenceofthePtSS2shared100 and98．63 highly identifywith PtrSS2 andPtrSS1，respectively．Conserved domain searehingresults showedthatthisproteincontainedtwoconservedfunctiondomains。5～ 552and554～ 744．Tissuedifferen— tialexpress．ion detected with qRT—PCR indicatedthatthePtSS2transcriptsweremoreabundantmRNA Productsinvegetativebudandstem tissue，and relativelowertranscriptsin root，itbelong t