中药蛋白酶抑制剂的筛选及防治急性肺损伤的作用研究.pdfVIP

中医药生物化学与分子生物学通讯 中药蛋白酶抑制剂I掌唠钪叔I璇台急’II生肺损伤Ij勺J作用脯 王继峰刘同祥 (北京中医药大学北京100029) 蛋白酶抑制剂(PI)广泛存在于动植物和微生物中，在体内能抑制蛋白酶活性，在许 多疾病及病理过程中有控制作用，如参与炎症、血液凝固、补体级联反应、细胞凋亡、激 素调节等。现代药理研究表明鱼腥草具有增强机体免疫力、抗病毒和抑癌等作用，临床主 要用于治疗呼吸系统疾病，如治疗肺痈吐脓、痰热喘咳、肺及气管病变(气管炎、肺炎、 支气管扩张、百日咳)。急性肺损伤(AU)是急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或多脏器功 能衰竭(MOF)的早期阶段，是指由各种肺内、外致病因素导致的急性进行性缺氧性呼吸 衰竭。ALI的发病率和死亡率很高，在美国每年大约有lO万人发生ARDS，其病死率高达 50％～70％，是临床上常见的死亡率极高的危重症之一，是目前医学界研究的一个热点。 为在中药中寻找出安全有效的植物源蛋白酶抑制剂，并探讨其作用和机理，本研究对60 种中药蛋自酶抑制剂的活性进行了筛选，并对鱼腥草蛋白酶抑制剂组分防治急性肺损伤的 作用和机理进行了研究，以期为临床用药提供科学依据。本论文的主要研究内容和结果如 下： 1具有蛋白酶抑制剂活性的中药筛选 本实验以胰蛋白酶为底物，以大豆胰蛋白酶抑制剂为对照，对临床应用较广的60种中 药配方颗粒，大黄、鱼腥草、麻黄、白芍、瓜萎皮5种药材的水、乙醇提取物的体外胰蛋 白酶的抑制作用以及这5种中药的水提取物进入体内的胰蛋白酶抑制剂活性进行了研究。 研究结果显示： l·l蛋白酶抑制荆活性较强的中药集中在发散风寒药及清热解毒药中。60种中药配方 颗粒中有13种中药在100mg·mlo浓度下对胰蛋白酶抑制作用较强，依次为三七、麻黄、 大黄、自芍、鱼腥草等；有9种中药在50mg·ml。1浓度下对胰蛋白酶抑制作用较强，依次 为茯苓、大黄、山豆根、麻黄、白芍、鱼腥草、连翘等；其中麻黄、大黄、鱼腥草、白芍、 连翘5种中药在上述两浓度下均表现出胰蛋白酶抑制作用。 l·2大黄、鱼腥草的水提取物，麻黄、白芍的70％乙醇提取物的体外胰蛋白酶的抑制 作用较强。大黄、鱼腥草、麻黄3种中药的水提取物和70％乙醇提取物均有较强的胰蛋白 酶抑制作用，瓜蒌皮的胰蛋白酶抑制作用不明显。 1·3大黄、鱼腥草、麻黄、白芍、瓜蒌皮水提取物大鼠灌胃给药。大黄、鱼腥草的含 药血浆对胰蛋白酶的抑制作用较强，瓜蒌皮水提取物对胰蛋白酶的抑制作用不明显。 2鱼腥草蛋白酶抑制剂组分的分离 本实验采用正交试验的方法，考查了影响鱼腥草水提取物蛋白酶抑制活性的因素，确 ·国家自然科学基金资助项目(30510403202；教育部长江学者和创新团队发展计划资助项目 BAll IB07)； (IRT0413)：教育部博士点科研基金资助项目(20060026019)：国家科技部支撑计划资助(2006 科技部国际合作计划资助． 2 中医药生物化学与分子生物学通讯 定了最佳提取条件为60C，加30倍量水，在pH9下煎煮3h，并以此条件对鱼腥草进行提 取，水提液减压浓缩，离心除去沉淀，上清液氯仿萃取，水层过滤除去沉淀后过大孔树脂， 分别用水、30％、50％、70％、95％7,醇洗脱大孔树脂，得组分1、2、3、4、5。氯仿层过 离子交换树脂，氨水洗脱，得组分6。 经试管法和薄层色谱法定性鉴别，组分l为多糖和糖苷类物质，组分2、3、4、5为黄 酮类物质、组分6为生物碱。测定各组分对胰蛋白酶活性的抑制，结果表明：蛋白酶抑制 剂活性最强的为组分6(生物碱)，其次是组分l(多糖类)和组分2、3、4、5(黄酮类)。 3鱼腥草蛋白酶抑制剂防治LPS诱导的大鼠急性肺损伤实验研究 本实验采用LPS诱导的大鼠急性肺损伤(ALl)模型，研究鱼腥草蛋白酶抑制剂对ALI 的防治作用。结果显示：鱼腥草蛋白酶抑制剂能减轻LPS诱导的急性肺损伤大鼠肺间质增 厚，减少肺间质和肺泡腔内出血、水肿及渗出