早产患者TNF—a基因启动子-308位点多态性与胎盘TNF-αmRNA、母血TNF-α表达关系的研究.pdfVIP

预防出生缺陷专业技术培训班教材 母血TNF．a表达关系的研究 蒲杰1曾蔚越2 【摘要】 日的探讨肿瘤坏死因子a(TNF—n)基因启动子一308G-*A砻；态性与早产遗传易感性的关 系。 方法2004年9月至2005年2月对四JII大学华西第二医院、四川省妇女儿童医院46例早产患者(根 据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)母血、胎盘组织和同期足月正 常产50例母血、20例胎盘组织进行研究。应用RT-PCR技术测定胎盘组织中TNF—amRNA的表达水平；采用 ELISA法测定母血清TNF—a水平。根据前期研究对TNF一俚基因启动子一308位点的基因分型结果，分析该位 点不同基因型间早产患者胎盘TNF—amRNA和母血TNF-a水平的差异，及其不同基因型与绒毛膜羊膜炎的相 关性。 结果早产感染组孕妇胎盘组织中n虾一amRNA及血清中11忭一a水平明显高于早产非感染组和正 95％CI 1．197—14．896)。结论TNF-a基因启动子·308位点多态性与早产、感染性早产的遗传易感性有 关，该位点突变引起TNF—Ct转录、翻译水平改变；TNF-a及其基因多态性可以成为早期预测、诊断早产和 宫内感染的指标。 【关键词】 早产 绒毛膜羊膜炎 肿瘤坏死因子Ⅸ 基因多态性 关于早产实验动物模型和人的一系列研究发现，羊水、血清【t，：】、胎盘【，】、子宫下段【·呻肿瘤坏 死因子伍(tumornecrosisfactor-a，TNF．a)的表达量均明显升高，且与不良的围生儿结局相关。细胞 因子TNF．a是早产尤其感染性早产发病机制中的一个重要因素。研究显示早产与遗传学因素有着密 产的关系的研究【5J表明，TNF．c【基因．308位点多态性与中国成都地区汉族早产遗传易感性相关，等位 amRNA、母血TNF—Ct水平在病例组、对照组以及病例组中两种基因型之间表达水平是否存在差异，以 期解释TNF．a在早产患者中表达升高的原因，探讨其在预测早产及早产合并绒毛膜羊膜炎中的作用。 l对象与方法 1．1研究对象及分组 选择2004年9月至2005年2月在四川大学华西第二医院、四川省妇幼保健院产科住院分娩的孕产妇 2l例，早产非感染组(无绒毛膜羊膜炎者)25例。 作者单位： 1．四川省妇幼保健院·四川省妇女儿童医院妇产科(成都610036) 2．四川大学华西第二医院妇产科(成都610041) 通讯作者 曾蔚越 ·96． 第二届全国生育健康学术研讨会论文汇编 1．1．1纳入标准 凡符合以下标准者纳入本研究，孕周明确、单胎、分娩孕周为28—36娟周和(或)有胎膜早破， 分娩方式为自然分娩或临产后因产程异常或胎儿窘迫行剖宫产术，产后经胎盘组织病理学检查有无 绒毛膜羊膜炎再分为早产感染组和早产非感染组。足月组：孕周明确、单胎、分娩孕周为37—4l“ 周和(或)有胎膜早破、无宫缩，分娩方式均为因产科手术指征或社会因素行剖宫产术。 1．1．2排除标准 病理妊娠如妊娠期高血压疾病、前置胎盘、胎盘早剥、妊娠期糖尿病、妊娠期肝内胆汁瘀积症以 及合并心脏病、糖尿病、甲亢等内外科疾病。 GG基因型组中有9例。 1．2方法 1．2．1标本收集及处理 所有孕妇在分娩前抽取肘静脉血5ml，静置5min后离心(3000r／min)10min，留取血清后置于一20 ℃冰箱保存备用于ELISA检测。在胎盘娩出后，立即于胎盘旁中央区取绒毛组织约50mg，生理盐水漂 洗后，滤纸吸干水份，再装入经DEPC处理过的EP管，快速放入液氮中，24h后再转移至一80℃冰箱保 存，备用于总RNA的提取。 1．2．2 RT-PCR检测测定66例胎盘组织中TNF．amRNA的表达 J．2．2．JRNA反转录合成cDNA第一链 a) 合成eDNA Buffer Free 2肛l，10xRT llA，Rnase 3．75pl，dNTP 按下列组成配制反转录反应体系：MgCl2