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第六章 蛋白质和DNA技术1.我们通常选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验,来提取和分离血清蛋白。请回答下列有关问题:
(1)实验前取新鲜血液,静置凝固后会析出淡黄色的液体——血清,其中含有的蛋白质有________、________等。
(2)血清蛋白提取和分离的活动程序为:________________________________________________________________________
________________________________________________________________________,
在染色和脱色步骤中,所用试剂分别为__________________、____________________。
(3)能利用电泳技术分离血清蛋白的原理是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析:本题考查提取和分离血清蛋白的相关知识。
(1)血清中含有两种球蛋白、凝集素等多种蛋白质。
(2)血清蛋白的提取和分离步骤为:点样→电泳→染色→脱色→制干胶板,其中染色、脱色所用试剂分别为质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液、体积分数为7%的醋酸溶液。
(3)血清蛋白为两性电解质,在一定条件下带有电荷,可在电场中移动,故可用电泳技术进行分离。
答案:(1)两种球蛋白 凝集素 ()点样→电泳→电泳→染色→脱色→制干胶板 质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液 体积分数为7%的醋酸溶液 (3)血清蛋白为两性电解质,在一定条件下带有电荷,可在电场中移动
2.血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。(1)将实验流程补充完整:A为________________,B为________________。凝胶色谱法的基本原理是根据________________而达到蛋白质分离的有效方法。
(2)洗涤红细胞的目的是去除________,洗涤次数过少,无法除去________;离心速度过高和时间过长会使______________________一同沉淀达不到分离的效果。洗涤干净的标志是________________________。释放血红蛋白的过程中起作用的是____________________。
(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是________________________________________________________________________
____________________________。如果红色区带__________________,说明色谱柱制作成功。
答案:(1)血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小 (2)杂蛋白(血浆蛋白) 血浆蛋白 白细胞和淋巴细胞 离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯 (3)准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内的一致 均匀一致的移动
3.下图为细胞内DNA复制过程示意图,该过程在体外也可进行,以获得大量相同的DNA片段,该项技术称之为PCR技术,又称多聚酶链式反应,请分析回答:(1)PCR过程与细胞内DNA复制相比,主要有两点不同:
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________、
________________________________________________________________________。
(2)PCR技术过程的三个步骤:______、______、________________________________________________________________________。
(3)假设PCR过程中,只用一条DNA片段作为模板,请计算30次循环后,反应物中大约有多少个这样的DNA片段?____________。
(4)PCR技术能在几小时内将极微量的DNA片段特异性地扩增上百万倍,从而解决了样品中DNA含量低,难以分离的难题。试举两例,说明PCR技术的应用。
_________
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