Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段克隆、序列及分析及原核表达.pdfVIP

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2017-09-03 发布于安徽
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Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段克隆、序列及分析及原核表达.pdf

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遗传 HEREDITAS (Beijing) 28(12): 1532~1540, 2006 研究报告 DOI: 10.1360/yc-006-1532 Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达刘忠渊, 王芸, 吕国栋, 王贤磊, 张富春, 马纪 (新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室, 新疆生物资源基因工程重点实验室, 乌鲁木齐 830046) 摘要: 利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR) 的方法, 克隆黄粉甲虫(Tenebrio molitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明, 获得 9 条新cDNA片段, 与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGEX-4T-1-tmafp-XJ430, 转化E.coli BL21 进行原核表达, SDS分析结果表明, 抗冻蛋白基因以可溶性融合蛋白表达, 相对分子量为 38 kDa 。构建真核表达载体pCDNA3-tmafp-XJ430, 免疫小鼠, 获得的抗血清滴度为 1:2 000 。Western blotting 结果为单一的条带, 证明该抗血清具有针对抗冻蛋白TmAFP-XJ430 抗原的专一性。关键词: 黄粉甲虫; 抗冻蛋白; cDNA 片段; 序列分析; 原核表达中图分类号: Q75 文献标识码: A 文章编号: 0253-9772(2006)12-1532-09 Cloning, Sequencing and Prokaryotic Expression of cDNAs for the Antifreeze Protein Family from the Beetle Tenebrio molitor LIU Zhong-Yuan, WANG Yun, LÜ Guo-Dong, WANG Xian-Lei, ZHANG Fu-Chun, MA Ji (Key Laboratory of Molecular Biology, College of Life Science and Technology, Xinjiang University Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Urumqi 830046, China) Abstract: The partial cDNA sequence coding for the antifreeze proteins in the Tenebrio molitor was obtained by RT-PCR. Sequence analysis revealed nine putative cDNAs with a high degree of homology to Tenebrio molitor