同种异基因移植后直接和间接识别途径中的供体抗原差异性研究.pdfVIP

同种异基因移植后直接和间接识别途径中的供体同种异基因移植后直接和间接识别途径中的供体 同种异基因移植后直接和间接识别途径中的供体同种异基因移植后直接和间接识别途径中的供体 11 抗原差异性研究抗原差异性研究 11 抗原差异性研究抗原差异性研究 蔡端，姚宇锋，项建斌 复旦大学附属华山医院外科，上海 （200040） E-mail ：xjbzhw@ 摘要摘要： ： 目的 探讨同种异基因移植后直接和间接途径识别的供体抗原的差异。方法 体外构 摘要摘要：： 建同种异基因移植后两种不同的供体抗原识别体系，分别通过B7反义肽来封闭树突状细胞 （dendritic cell，DC）表面B7，诱导生成受体耐受性T细胞，再与通过不同途径呈递的供 体抗原进行单向混合淋巴细胞反应 （MLR），观察耐受性T细胞增殖情况。结果 通过阻断直 接识别途径中的共刺激通路形成的耐受性受体T细胞对间接途径呈递的供体抗原有高反应 性，通过阻断间接途径中的共刺激通路形成的耐受性受体T细胞对直接途径呈递的供体抗原 同样有高反应性。结论 同种异基因移植后两种不同识别途径呈递的供体抗原表位及其激活 的受体T细胞克隆是不一致的。 关键词关键词：：免疫耐受，移植，直接识别途径，间接识别途径 关键词关键词：： 中图分类号中图分类号：：R657.3 中图分类号中图分类号：： 1.引言1.引言 1.1.引言引言 同种异基因移植后的排斥反应阻碍着器官移植的发展，成为移植术后的主要并发症之 一，主要包括急性排异和慢性排异两部分，与之相对应的是抗原的两种不同的识别途径，即 直接识别途径与间接识别途径。直接识别是受者的T细胞直接识别移植物中供者抗原提呈细 胞(APC)表面的同种异型抗原，间接识别是受者的 T细胞识别自身 APC 提呈的供者同种异型 抗原。既往研究[1-2]利用供体或者受体未成熟 DC，分别诱导出受体对直接和间接识别途径呈 递的供体抗原的免疫低反应性。本实验进一步通过构建体外不同的供体抗原识别体系来研究 两者之间的差异。 2.材料与方法2.材料与方法 2.2.材料与方法材料与方法 2.1 实验动物2.1 实验动物：：受体 C3H（H-2k）小鼠、供体C57 (H-2b)小鼠，7～9周龄，重约 25 g， 2.1 2.1 实验动物实验动物：： 雌雄不限；均购自中国科学院上海实验动物中心。 2.2 试剂2.2 试剂：：B7反义肽 N’-EFMYPPPYLD-C’，委托上海吉尔生化有限公司合成，纯度为 99%， 2.2 2.2 试剂试剂：： 分子量为 1271.6；RPMI1640 干粉(Gibco,USA)；RPMI1640 完全培养液(内含RPMI1640 干粉 10.4g/L，10%小牛血清、2 mmol/L 谷氨酰胺、0.05mmol/L的 2-巯基乙醇、160U/ml 的庆大 霉素、20mmol/L 的二羟乙基呱嗪乙烷磺酸、1mmol/L 的丙酮酸钠)；RPMI 不完全培养液(不 加小牛血清，其它成分与 RPMI1640 完全培养液同)，3H-TdR 购自中国科学院上海原子能研 1 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金 （20030246069 ），国家自然科学基金 ）资助 1 究所；重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 （rmGM-CSF）；重组小鼠肿瘤坏死因子 （rmTNF-α）（以上细胞因子购自R＆D公司）。 2.3 供体抗原的制备2.3 供体抗原的制备 无菌取小鼠脾脏，碾磨过滤网，以淋巴细胞分离液离心制备供体 2.3 2.3 供体抗原的制备供体抗原的制备 脾脏淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为 1×106/ml，于液氮和 37℃条件下反复冻融6 次制成细 胞碎片悬液，用0.22μm 微孔滤膜过滤，4℃保存备用。 2.4 供体模拟未成熟