第一章光谱分析(四)荧光分析法.pptVIP

第一章 光谱分析第二节 荧光分析法 耗能方式 ①在同一能级中分子间的相互碰撞消耗能量； ②无辐射衰减转给周围分子变成振动消耗； ③辐射荧光——以光子的形式释放能量； ④光分解消耗分子内部的能量。 分子荧光的类型 物理发光 指荧光分子吸收了光能而产生的荧光，称为物理发光。也称光致荧光。 化学发光 是指分子与分子之间的化学反应所产生的化学能，在化学反应过程中释放能量而发射荧光。也称化学荧光。 生物发光 通过生物体内的荧光酶与荧光物质相互作用，在生物化学反应过程中所释放出来的光能。也称生物荧光。 荧光分光光度计根据发射光谱的特点设计的紫外分光光度计是根据吸收光谱设计的,二者差异主要有： 测光角度不同 单色器位置不同 比色杯不同 基本功能：　　(1)激发光谱、发射光谱；　　(2) ms级发光寿命测定；　　(3)荧光、磷光测定；　　(4)液体、固体样品测定 四、分析方法 1、定量分析 ①标准曲线法 同紫外可见光度计的标准曲线法 ②内标法 在一定浓度范围内，选择一个标准样品浓度，测得值与同样条件下的未知样品值进行比较 未知样品浓度（mg/mL）=（A1/A2）×C A1——未知样品的荧光发光值 A2——标准样品的荧光发光值 C——标准样品浓度 2、定性分析 根据荧光发射的波长和出现的峰位，确定物质结构的某些特征。 * * 第一章 光谱分析第二节 荧光分析法 一、概述 二、分子发光的理论 三、荧光分析仪器 习题 * 第一章 光谱分析第二节 荧光分析法 一、概述 1、荧光光度分析法 由激发态能级回到基态能级的过程中以光的形式放出多余的能量，并发射出比原波长更长的光谱，这一过程称分子发光，检测分子发射光谱的分析方法称为荧光光度分析法。 一、概述 2、荧光分析特点 专一性强 灵敏度高 选择性强 发光发式多 可分析参数多 返回 * * 第一章 光谱分析 第二节 荧光分析法 二 、分子发光的理论 较高电子激发态振动能级 以热和无辐射的形式释放能量 最低第一级电子激发态振动能级 以光子的形式释放能量 基态分子 能量吸收过程 λ 磷光 荧光 发射荧光和磷光的示意图 * 常见的光致发光现象是荧光和磷光 荧光和磷光的主要区别:? ①荧光: 激发光停止照射后，发光过程持续 10-9-10-6s 磷光: 发光过程持续10-4-10s ②荧光是从最低单线激发态发出，磷光则由最低三重态能级发出。 二、分子发光的理论 第一章 光谱分析 第二节 荧光分析法 * * * 激发光谱: 固定测量波长为荧光（或磷光）最大发射波长，然后改变激发波长，以激发光波长为横座标，荧光强度为纵座标作图，即可绘制。 发射光谱: 固定激发光波长为其最大激发波长，然后测定不同的波长时所发射的荧光或磷光强度，将荧光的光波长为横座标，荧光强度为纵座标作图便可得到荧光光谱 第一章 光谱分析 第二节 荧光分析法 发射光源 激发光源 激发光谱波长 发射光谱波长 荧光分子 激发光源 激发光谱波长 发射光谱波长 荧光分子 发射光源 (改变波长) 选择最大发射波长 固定波长 (改变波长) 激发光谱测试示意图 发射光谱测试示意图 * * * 荧光量子产率φ 分子产生荧光必须具备两个条件： a 分子必须具有与所照射的辐射频率相适应的结构，才能吸收激发光提供辐射能； b 分子吸收了与其本身特征频率相同的能量之后，必须具有一定的荧光量子的能力。产生荧光量子的强弱可以用荧光产率φ表示。它是荧光分子发射荧光的能为参数。（也称荧光效率或量子效率)。 第一章 光谱分析 第二节 荧光分析法 * 荧光过程的量子效率φf : 如kfkc和kx，φf→1。 如kc或kxkf，则φf → 0。 kf——荧光发射的速度常数； kc和kx——为其它有关速度常数的总和。 第一章 光谱分析 第二节 荧光分析法 * 对低浓度溶液样品，保持一定最大发射波长和最大激发波长条件下测得荧光强度If可表示为： If =2.303 ? I0 ?bc I0——为激发光强度；b—— 为液池厚度； C—— 为浓度； ? ——摩尔吸光系数 在一定条件下： If = K c 荧光强度与荧光物质的浓度成之正比 返回 第一章 光谱分析 第二节 荧光分析法 * 荧光猝灭（荧光熄灭）： 广义的说，指任何可使物质荧光强度下降的作用，任何可使荧光强度不与荧光物质的浓度呈线性关系的作用，或任何可使荧光量子产率降低的作用。 狭义的说，指荧光分子与溶剂