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《生物工程进展》1997, . 17, . 5
V o l N o
RA CE : cDN A 末端快速扩增技术进展
明 洪 黄秉仁
中国协和医科大学基础医学院
中国医学科学院基础医学研究所
国家分子生物学重点实验室 北京 100005
基因表达水平和模式的变化驱动着生物体 35 的接头[ ( ) ] 为引物反转录总
bp dT 17 adap to r
( )
内主要的生物学过程。分离和克隆基因是研究 RN A 得到 - cDN A 。引物的接头有一个在基
基因结构、功能以及表达的基础。以往建立和筛 因组DN A 中罕见的限制性 内切酶的酶切位
选 cDN A 和DN A 文库来分离克隆目的基因的 点, 这样就在未知的cDN A 末端接上了一段特
经典方法繁琐而且工作量大。 技术的出现 殊的接头序列。接着, 用一个基因特异性引物
PCR
极大地提高了分离克隆目的基因的效率。反向 ( ) ( ) (
3 ′ 与少量第一条 链退火 一般
am p cDN A
、锅柄 ( ) 、 ) ( )
PCR PCR P anh an d le PCR vecto ret te 1n g 并延伸, 产生互补的第二条 + cDN A
PCR 、连接介导 PCR (L igat ion m ed iated PCR ) 链。然后用 3 ′ 和接头引物进行 循环即
am p PCR
和捕获寡盒介导 ( 可扩增得到 双链。扩增的特异性取决于
PCR Cap tu re O ligo ca sset te cDN A
m ed iated PCR ) 等PCR 技术为扩增已知序列旁 3 ′ 的碱基只与 目的 分子互补。用接
am p cDN A
[ 1 ] ( )
侧的未知DN A 片段提供了捷径 。然而, 这些 头引物来取代 dT 17 接头引物则阻止了长 dT
方法实验周期长、费用高, 而且常出现 PCR 扩 碱基引起的错配。
增效率或特异性低等问题。因而利用这些方法 (
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