靶向小鼠TNF-α基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定.pdfVIP

赵颖杰等 靶向小 鼠TNF．0【基 因RNA干扰慢病毒载体 的构建及举定 第 7期 · 927 · doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．07．014 靶 向小 鼠TNF．0基【因RNA干扰慢病毒载体 的构建及鉴定① 赵颖杰 王吉波② 辛苗苗 梁宏达 刘相萍③ 杨 垄③ 隋爱华③ (青岛大学附属医院风湿免疫科，青岛 266003) 中图分类号 R392-33 文献标志码 A 文章编号 1000-484X(2014)07-0927-06 [摘 要] 目的：构建靶向小鼠TNF-基因的RNA干扰慢病毒载体 ，为RNA干扰基因治疗提供基础。方法：设计 、合成 3组靶向TNF．基因的特异小干扰 RNA (siRNA)：siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照 siRNA，体外转染小鼠巨噬细胞株 RAW264．7，用real—timePCR和ELISA法检测其对经脂多糖刺激的RAW264．7细胞表达TNF—、IL一1B、IL．6的影响。筛选出特 异且抑制性高的siRNA，根据其序列设计合成寡核苷酸链 ，构建表达短发卡RNA(shRNA)的重组慢病毒质粒并测序，经鉴定 质粒与包