联合应用反应停与抗VEGF单抗靶向抑制荷H-%2c22-肝癌小鼠肿瘤生长的实验的研究.pdf

中文摘要 联合应用反应停与抗VEGF单抗靶向抑制 荷H22肝癌小鼠肿瘤生长的实验研究 摘 要 目的：依据靶向阻断新血管生成可有效抑制肿瘤生长的 原理，研究联合应用抗VEGF单抗与反应停两种抗血管生成 药对荷Hzz肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用，探讨联合应用抗 VEGF单抗与反应停作为一种新型抗肝癌方式的可行性。 方法：1小鼠肝癌移植瘤模型的建立：60只纯系清洁级 种植癌细胞，取小鼠左后肢大腿外侧为种植点，抽取0．2ml 肿瘤细胞悬夜(约含4×106个细胞)注入种植点皮下。 2动物分组及肿瘤生长观察：肿瘤种植后1w，可观察到 全部小鼠有明显皮下肿块形成，第10日选取其中肿瘤生长良 好肿块直径约5mm的小鼠40只，将动物随机分为4组，即盐 水组(对照组)，抗体组，反应停组，抗体加反应停组，每 组10只。用游标卡尺测量肿块长径(a)及横径(b)，每日测量1次， 肿瘤体积(V)=a×b2／2。 3药物给予：肿瘤接种后lOd即分组当日开始给药，对 照组每日每只经尾静脉注射生理盐水0．2ml；反应停组灌胃反 经尾静脉注射抗VEGF单抗0．2ml；联合组每日每只灌胃反应 VEGF单抗0．2ml。连续给药12d。 4瘤体称质量：抗体给药结束后继续观察肿瘤生长2w， 中文摘要 于肿瘤种植后36d处死动物，称鼠重，取瘤组织，仔细分离肿 块周边皮肤及非肿瘤组织，瘤体称质量并计算瘤质量抑制率， 瘤质量抑制率(％)=(卜实验组平均瘤质量／对照组平均瘤质 o／60。 量)×100 5免疫组化微血管密度(MVD)测定：将肿瘤组织切成 3mm厚片状，40∥L甲醛固定24h，脱水石蜡包埋，切片厚5岬． 免疫组化SABC法：一抗为多克隆兔抗鼠CD34抗体，工作浓 作按试剂盒说明进行，DAB染色，苏木素复染，树胶封片。选血 管内皮细胞染色密集区于高倍镜(×200)下计数染色细胞，每 片计数5个视野取平均值。 水化后，用3％过氧化氢去除内源性酶，微波抗原修复，然后加 入兔抗人VEGF抗体，DAB显色，苏木精复染，光镜观察结果。 分别用己知阳性的肝癌组织切片作阳性对照，正常小鼠和兔 血清及PBS代替一抗作阴性对照。细胞浆或核呈棕黄色颗粒 状分布者为阳性染色。阳性染色细胞≤10％者为阴性表达，细 胞阳性染色lO％者为阳性表达。 7统计学处理：各项计量资料指标均以均数±标准差 13．0统计软件进行统计分析，应用 (X±s)表示，应用SPSS 重复测量数据方差分析处理肿瘤体积变化数据，多个独立样 本非参数检验处理瘤质量抑制数据、MVD及VEGF表达率数 据，P0．05为差异有统计学意义。 结果：l抗VEGF单抗与反应停对肿瘤生长的抑制情况： 种瘤后10d即动物分组时各组肿瘤体积无显著性差异，给药 6d后，与对照组相比，各实验组肿瘤生长呈现减慢趋势，但各 中文摘要 组差异不显著。种瘤后20d虽lJ给药后10d，抗体组、反应停组 和联合组肿瘤体积显著小于对照组，且联合组抗体组反 应停组，此显著性差异一直持续至动物处死(种瘤后36d)。 2瘤质量抑制率：反应停组、抗体组和联合组在动物处 明显抑制肿瘤质量增长作用，联合组瘤质量明显低于反应停 组和抗体组。 3肿瘤组织微血管测定(MVD)：免疫组化法处理结果 显示，各实验组MVD低于对照组，联合组较反应停组与抗体 组MVD低，MVD在抗体组与反应停组之间差异无统计学意 义。 4VEGF表达率测定：免疫组化法处理结果显示，各组 VEGF表达率分别为：反应停组45％、抗体组35％、联合组 25％，显著低于对照组80％。 结论：本实验研究结果显示，虽然反应停与抗VEGF单 抗两种药物抗血管生成作用基理不同，但在抗H22转移瘤新生 血管生成上有协同作用，并且这两种药相对于肿瘤患者来说 使用限制较少，易于普及，有望为临床提供一种新的肝癌治 疗方式。 关键词：肝癌；小鼠；抗VEGF单抗；反应停；靶向治 疗 英文摘要