解毒消癥饮对胃腺癌细胞凋亡作用和线粒体膜电位影响的流式细胞术研究.pdfVIP

2007；36(1)：25-46． G a1．Inductionof tumorcellsecretionof 【9】 Andreola，LRivoltini，CCastelli，et lymphocyteapoptosisby 95(1303-16． FasL-bearingmicrovesicles[J]．JExpMed．2002；10)：1 解毒消瘾饮对胃腺癌细胞凋亡作用和线粒体膜电位影响的流式细胞术研究 胡海霞12,3,4，郑良朴12,3,4，幸陈文列1，2·3r，林久茂1，2，3，4 陈旭征2，一，林薇12，“，赵锦燕12_，3，4 1．福建中西医结合研究院重点实验室： 2．福建省中西医结合老年性疾病重点实验室(福建中医学院)； 3．福建省高校中西医结合基础重点实验室(福建中医学院)； 4．国家中医药管理局三级科研实验室．中药药理(细胞结构与功能)实验室，福州350108 摘要目的：研究中药复方解毒消瘾饮对胃腺癌细胞凋亡作用和线粒体膜电位的影响。方 法：大鼠随机分组为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，分别用不同浓度解毒消瘾饮 灌胃。饲养7天后，制取含药血清。不同含药血清与胃腺癌细胞共培养24、48、72小时， MTT法检测细胞的增殖情况，流式细胞仪观察不同时间不同剂量组的细胞凋亡率、细胞周期 及线粒体膜电位的变化。结果：与对照组比较，含药血清组可以显著抑制胃腺癌细胞的生长， 且呈剂量依赖性；含药血清与细胞共培养24小时后，细胞的凋亡率显著增加，细胞周期显示 呈现二倍体的凋亡峰，而线粒体膜电位则较对照组明显降低。结论：解毒消癞饮能够抑制胃 腺癌细胞的生长，同时又可促进细胞的凋亡，这可能与中药含药血清可以提高细胞的凋亡率、 改变细胞周期、降低线粒体膜电位有关。 关键词解毒消癃饮；胃腺癌细胞；细胞凋亡；线粒体膜电位；流式细胞术 我们前期的临床和实验研究已经表明，中药复方“解毒消瘤饮”为治疗消化系恶性肿瘤 的临床经典验方。“解毒消瘤饮”主要由白花蛇舌草、半边莲、夏枯草、山慈姑四味中药组成， 具有清热解毒、清肝火、活血散结、利尿消肿、抗肿瘤等功效，临床上主要用于治疗消化道 肿瘤【11。胃癌是我国常见恶性消化道肿瘤，临床上又以胃腺癌为主，故本研究选择胃腺癌细 胞为研究对象，通过大鼠随机分组获得不同剂量的含药血清对细胞进行干预，观察解毒消瘾 饮对该细胞的促凋亡作用及其作用机制。 材料与方法 实验动物及细胞株 胃腺癌细胞株BGC一823购自中国科学研究院上海细胞所。 药品及主要试剂 白花蛇舌草、鬼针草、苦参、山慈姑四味中药购自福州回春医药连锁有限公司。RPMI 试剂盒为BECToNDICKINSON产品；AnnexinV／PI试剂盒及线粒体膜电位检测试剂盒为南 京凯基生物公司产品。 仪器设备 ELX808)、流式细胞仪(美国BD公司)。 中药复方的制备 煎两次，过滤水煎液，混合后加热，次日使用旋转蒸发仪进行浓缩。方药按成人(60kg)临 床用量10倍、5倍及相等剂量，进行罐装，保存于4。C备用。 实验动物及分组 饲以SPF级专用饲料，饮用水为净化水。动物随机分组，对照组、低剂量组、中剂量组、高 剂量组各10只，分8笼进行饲养，每日进行记录。应用灌胃形式，对照组及低、中、高剂量 组分别用净化水、低剂量药液、中剂量药液、高剂量药液进行灌胃，灌胃量为每只大鼠2mL， 1天两次，连续灌胃7天。观察动物一般情况，包括体重、进食情况、毛发、活动情况等。 含药血清的制备 la 离心，取上清。56℃、30rain进行补体灭活，经0．22m滤膜抽滤除菌，血清按组别分装后 ．80℃保存备用。 细胞培养及药物处理 用含10％(体积分数)胎牛血清的RPMI 湿度培养箱中进行连续培养，每2．3天传代一次。通过MTT实验进行最适作用浓度筛选测定， 选取含药血清中剂量筛选，用培养液配制5％、10％、20％、30％、40％各浓度的含药血清， X