类胡萝卜素合成途径相关酶基因在结球白菜不同组织中的表达研究.pdfVIP

类胡萝l＼素合成途径相关酶基因在结球白菜 不同组织中的表达研究 戚佳妮，于拴仓，张凤兰‘ (北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京100097) 摘要：在获得大白菜类胡萝卜素合成途径相关基冈同源片段的基础上，采用 实时荧光定量PCR技术研究了这些基因在桔红心和普通白心大白菜不同组织中的相 对表达量。结果表明，13个类胡萝卜素合成相关基因在根、茎和侧芽中的表达量低于 和Ⅳ隘泐基因的相对表达量高于普通白心材料；而胁S、三C晒，aⅨ、ZEP和VDE 的相对表达量则相反。 关键词：大白菜；类胡萝卜素合成途径；实时荧光定量PCR 随着人们对自身健康的关注，类胡萝卜素已成为决定植物产品品质的霞要指标之一。桔红 心大白菜叶球内B一胡萝卜素大量积累，是普通白菜的6倍以上，使其呈现桔红色，显著提升 了大白菜的品质。因而，弄清大白菜桔红心形成的遗传基础具有乖要的理论和实践意义。 类胡萝b素是自然界第二大类色素，包含了700多个成员。类胡萝卜素4i仅具有再要的生 理功能，而且赋予植物以绚丽的色彩，更为重要的是其医药保健功能受到普遍关注。20世纪 50、60年代，人们就已逐渐阐明了类胡萝卜素生物合成的途径。高等植物类胡萝卜素在质体中 通过类异戊二烯途径合成，包括了缩合、脱氢、环化、羟基化及环氧化等一系列反应(Taylor and and Ramsay2005：RSmerFraser2005)。迄今，应用转座子标签法和图位克隆等技术己 分离出类胡萝卜素代谢过程的所有合成酶基因，数目已超过200多个，它们分别编码了20多种 eta1． 类胡萝卜素形成酶，这些基因在植物和光合细菌中均具有极高的保守性(Hirschberg eta1．2007)。 1997；Just 植物体内类胡萝b素代谢存在许多调控机制，如转录调控、转录后调控、调节基因、环 境因素和激素等，转录调控是目前研究最多的一种。早在20世纪40年代，在番茄中就鉴定出 许多影响色素形成的单基因突变体，从转录水平阐明了八氢番茄红素合成酶基因(舟D、八 氢番茄红素去饱和酶摹因(ZD59、胡萝卜素B一环化酶基冈LCY-B和LCY-E和类胡萝卜素异 构酶基因(CRTISO)等基冈在番茄转色和类胡萝卜素形成中的重要作用。因而，研究类胡萝卜 素代谢相关基因的表达特征有可能揭示大白菜桔红心形成的遗传基础。 有鉴于此，本项研究将以类胡萝卜素合成相关基冈为候选基因，通过同源克隆的方法获 得大白菜相关基斟的cDNA片断，在此基础上分析候选基凶的表达特征，试图发掘控制大白菜 桔红心形成的关键功能基因，为大白菜桔红心分子育种奠定基础。 1材料和方法 1．1试验材料 本实验选取两个大白菜材料，9l—112为自交9代的大白菜普通白心自交系，T12-19为桔 红心DH系，均来自北京农林科学院蔬菜研究中心。 1．2选取方法 2008年7月于空调温室中育苗，3_4片真叶时定植于大棚。于收获期进行取样，分别采集 球叶、根、短缩茎和侧生芽。考虑到桔红心大白菜的颜色从外叶至内叶逐渐加深，本试验对桔 +基金项目：国家农业行业计划(nyhyzx07．007)及“现代农业产业技术体系建设专项资金”资助 ★通讯作者：张风兰(1964一)，女，博士。研究员，研究方向：蔬菜遗传育种与分子生物学。Tel：010 E-mail：zhangfenglan@nerev．org 160 红心和普通白心大白菜在取材时进行了分类，将叶球由内至外分为三个层次分别取样。液氮速 冻后．80℃保存备用。 1．3RNA提取、纯化及cDNA一链的合成 cDNA一链的合成采用Tiangen公司QuantcDNA一链合成试剂盒。 1．4引物设计 根据白菜、拟南芥、番茄、辣椒、胡萝卜、小麦和玉米等植物中分离的类胡萝卜素合成 途径相关基因的序列，利用Gene Tools等软件设计简并引物或特异扩增引物，并通过克降测 序得到桔红心大白菜的相关基因片段。然后设计特异扩增引物，将扩增产物长度控制在100— 150bp，引物序列见表l。 表I实时荧光定量PCRiJI物 1．5实时荧光定量PCR体系的建立 本实验