第五章分子荧光分析法(药学).pptVIP

教学目标和要求 1.了解荧光和磷光 2.掌握 荧光分析法的基本原理： 荧光的产生、定性、定量方法 3. 掌握影响 F 因素： 分子结构、外因（温度、溶剂、酸度、表面活性剂、荧光熄灭剂、散射光和激发光等。 4.了解荧光分析仪器的结构及类型： 荧光光度计和荧光分光光度计，学会分析操作技术。 §1 概述 Introduction §2 基本原理 Basic Principle 一、分子荧光 第三节 荧光定量分析 一、荧光强度与溶液浓度的关系 第四节 仪器 一、仪器的构造及原理 有些物质本身不发荧光或荧光较弱，但和金属离子形成配合物后，如果刚性和共平面性增加，就可以发荧光或增强荧光。如8-羟基喹啉是弱荧光物质，与Mg2+、Al3+ 等金属离子形成的配合物的荧光增强，利用这一特点可以间接测定金属离子。 3、取代基团对分子荧光的影响 给电子取代基：能增加分子的π电子共轭程度，使荧光效率提高。如—NH2、—OH、—OCH3、—CN、—NHR、—NR2等， 吸电子取代基：可减弱分子π电子共轭性，使荧光减弱甚至熄灭。而-COOH、—NO2、—C=O、—F、—Cl等 还有一类取代基则对荧光的影响不明显，如—R、—SO3H、—NH3 等。 苯环取代基 对荧光的影响 （三）荧光试剂（荧光条件） 1、荧光胺 2、邻苯二甲醛 3、1-二甲氨基-5-氯化磺酰萘 4、测定无机离子的荧光试剂（表12-1） 三、影响荧光强度的外部因素 1、温度 当温度升高时，介质粘度减小，分子运动加快，分子间碰撞几率增加，从而使分子无辐射跃迁增加，荧光效率降低。 2、溶剂 （1）荧光强度在一定范围内可随溶剂黏度的 减小而减小； （2）溶剂和荧光物质形成化合物，改变物质 的性质； （3）荧光波长随溶剂极性增大而长移。 3、表面活性剂 增溶、增敏、增稳作用。 优点： 1）增加荧光物质的溶解度； 2）增加摩尔吸光系数； 3）增加荧光物质的稳定性。 4、pH值 （1）溶液pH值改变，物质分子和其离子间的平衡也随之发生变化，而不同形体具有其各自特定的荧光光谱和荧光效率。 例如苯胺： （2）溶液pH值的改变会影响配合物的组成，从而影响它们的荧光性质。 Ga3++邻-二羟基偶氮苯pH3～41:1配合物（荧光） Ga3++邻-二羟基偶氮苯pH6～71?2的配合物（无荧光）。 5、荧光熄灭 定义：由于荧光物质分子间或与其它物质相互作 用，引起荧光强度显著下降的现象叫做荧 光熄灭或猝灭。 荧光熄灭剂：卤素离子、重金属离子、氧分子、 硝基 化合物、重氮化合物和羧基 化合物等。 荧光熄灭机制： 激发态荧光分子和熄灭剂分子碰撞，将能 量转移到熄灭剂而使荧光熄灭； 荧光分子与熄灭剂分子作用生成了本身不发光的配合物； 荧光物质分子中引入重原子（溴或碘）后，易发生系间窜越而转变为三重态； 当荧光物质浓度较大时，激发态分子和基态分子发生碰撞。溶液浓度越高，自熄灭现象越严重； 溶液中溶解的氧分子能引起几乎所有的荧光物质产生不同程度的荧光熄灭。 荧光熄灭法： 利用荧光强度的减小与熄灭剂的浓度呈线性关系建立的 对荧光熄灭剂的定量分析法。 例如：铝-桑色素的配合物与熄灭剂氟浓度成反比 6、散射光（scattering light） （1）. 瑞利散射光 光子和物质分子发生弹性碰撞，光子运动方向发生改变，其波长和激发光相同。 消除：选择适当的荧光测定波长或选用滤 光片即可消除其影响。 （2）. 拉曼散射光 光子和溶剂分子发生非弹性碰撞，使光子能量减小或者增加，光的波长增长或变短，这两种散射光均称为拉曼（散射）光。其中波长较长的拉曼光因其波长与物质的荧光波长相接近, 故对测定的干扰较大。 区别： 瑞利散射光波长与激发光波长相同； 拉曼光波长随激发光波长的改变而改变，长波拉曼光 可干扰荧光测定； 荧光波长与激发光波长无关。 320nm 320nm 448nm 350nm 448nm 350nm 400nm 360nm 激发320nm硫酸奎宁 激发350nm硫酸奎宁 散射光谱 散射光谱 根据Beer定律 所以 由于溶液的荧光强度与溶液对光的吸收程度及荧光效率成正比，即 * 第十二章 分子荧光分析法Molecular fluorescence Analysis主讲：姬晓灵 内容： 1. 概述 Introduction 2 . 基本原理 Basic Principle 3 .溶液的荧光强度 Fluorescence inte