1.2《基因工程的基本操作程序》课件.pptVIP

2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： DNA分子杂交 互补的核苷酸序列通过碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,严格遵守碱基互不配对原则。 因此，当用探针与转基因生物的DNA杂交时，如果差距显杂交带（用特殊的显影装置可以看见），则说明目的基因已插入受体细胞的染色体DNA中。 抗原—抗体杂交 实例：检测抗虫棉是否翻译出毒蛋白 从苏云金杆菌中提取毒蛋白，注入某种动物体内，从动物血清中分离相应的抗体，并用荧光标记该抗体。 标记的抗体与抗虫棉的细胞提取液混合，若出现杂交带，则表明抗虫基因已在棉花细胞中表达。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体（核心） 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法等 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） a a 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 基因枪法（花粉管通道法） 植物组织培养 脱分化和再分化 耐盐基因 一定浓度盐水浇灌 1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 练习 2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 3）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 练习 * 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 可以举出几个例子吗？ （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 1.基因文库：概念见P9 2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 基因组DNA文库 部分基因文库 如：cDNA文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 1、从基因文库中获取 3.基因文库的构建方法之一 （1）直接分离法(鸟枪法) 基因组文库的构建 提取生物某发育时期的mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 反（逆